Експериментални рад на трансплантацији алогених кератиноцита на вештачки створене ожиљке белих пацова

Жеља да се користи ћелијски потенцијал и потреба за тражењем нових ефикасних метода за побољшање естетског изгледа ожиљака довели су до идеје покушаја проучавања могућности трансплантације кератиноцита на ожиљцима.

Да би доказао могућност коришћења кератиноцита културе да побољша изглед ожиљака експериментални рад је урађено на белом лабораторијских пацова, који су створили ожиљака површину. Модел рутине пацова добијен је као резултат лечења уметно нанетих рана на леђима, дуж кичме. Пацови су цут комаде исте коже, величине 2к3 цм После 2.5 месеци након операције "симулација ожиљака" пацова изведено Дермоабразија хирургија (уклањање горњих слојева преко игниоператион бурага) и трансплантираних алогеној кератиноцита изолованих из коже младих пацова 2-4 дана. Након рођења.

Изолација и развој епидермоцита пацова изведена је у лабораторији ћелијских технологија Института за цитологију РАС следеће технологије.

Кожа је испрана у физиолошком раствору Ханкс-а који садржи 200 У / мл гентамицина, исецкан на мале делове површине 0,2-0,5 цм ². Коцке за кожу су инкубиране у 0,5% раствору дисаспазе у балансираном раствору пуфер фосфата са фосфатом на 37 ° Ц на сат. Комади су затим пребачени у Дулбецков фосфат са пуфером пуфером и епидермис је одвојен од дермиса. Епидерм је инкубиран у 0.125% раствору трипсин 10-15 минута уз мешање брзином од 50 об / мин, након чега је ензим заустављена додатком 5% феталног говеђег серума. Једна трећина од проистекле суспензије ћелија је коришћена у чистом облику једног од опција трансплантација ожиљака, други трећи узгајане на домаћем биокомпатиблном облагање филмом "Полипор", трећи - на Петријевог без супстрата. Рад дермабразије добијених ожиљака код пацова с каснијом трансплантацијом епидермоцита пацова на њима изведен је под анестетском анестезијом користећи топлотну кутију.

Прва група пацова после дермоабразијом о полирана, испран физиолошким раствором и сушен површина стерилне румен монитрано комади травњака, који је депонован кодиран Алогена пацова епидермотситов густе суспензије у концентрацији од 1,5 милиона ћелија по 1 мл (према подацима Института за цитологију). Батистовие комади се уклапају у полирани ожиљак, тако да ћелије леже на површини ожиљака. На врху је пришивљен завој неколико слојева газе, који је пришивао на ивице ожиљака.

Дио добијене суспензије ћелије је посуђен у посудама Петри на стерилним филмовима Полипоре резаним у облику чаша, а други део на Петријевим јелима без филма. Гајење је изведено у ФАД медијуму који се састоји од смеше ДМЕМ и Ф12 у односу 3: 1. Уз додатак 10% феталног говеђег серума, 5 μг / мл инсулина (Сигма), 0,5 μг / мл хидрокортизон хемисукцината (Сигма). 10 μг / мл епидермалног фактора раста ЕГФ (Институт за цитологију РАС, Санкт Петербург). Друга и трећа група пацова са 7 особа су радила 6 дана након првог. До овог времена вишеслојни слојеви су формирани од суспензије посејаних кератиноцита у петријевим јелима, који су трансплантирани на пацове. Друга група је трансплантирана епидермоцитима на филму, трећа група - са вишеслојним слојем без подлоге. Након 7 дана, вишеслојни слојеви алогичних кератиноцита (МПАЛК), посечени на Полипоре филмове, трансплантирани су културом директно на површину ране. Изнад филма, како би се избјегло његово сипање, фиксирана је вишеслојном газом и шивом на кожу пацова.

Пре пресађивања кератиноцити трећу групу пацова узгајане без супстрата, производећи одвајање ПАЦ из дна Петри дисх Диспасе третман, имају способност да селективно раскине Дермо-епидермални комуникацију. Под дејством вишеслојног резервоара Диспасе уништава везу слоја базоцелуларних на дну Петри посуду и у много мањој мери, утиче на међућелијску комуникацију, што омогућава да се "уклоне" цео слој. Одређивање вишеслојног слоја ћелија према диспосицији је извршено на следећи начин. Од Петри посуде помешан Преносни медијум, ћелијске плоче су испране три пута са медиум садрже антибиотике, нарочито - гентамицин (0,2 мг / мл). Вишеслојна слојеви сипа 0,125 раствор% Диспасе ( «Сигма») и постављене у инкубатор где су инкубирана на т = 37 ° Ц током 20-30 минута. Појава белог Цоролла, љуштење око периферије резервоара - показатељ почетка процеса га одваја од ивица и дну Петри шољи. Неколико минута након почетка процеса раздвајања, Диспасе раствор је испражњена 2-3 пута епителне слојеви се исперу са медијумом. Он је примењена површина епидермалног слоја, Фиксно цуп пиеце стерилном воунд дрессинг "Леитх-боја, која се цепа одвојен Диспасе формирање, даљи раздвајање дну чаше са шпатулом Употреба офталмолошке пинцете слоју уз облагање салвети." Леитх-цолор "(Руссиан ) одвојио од дну Петријевог и пажљиво пребачен у припремљену површину ожиљка. Салвете "Лита-цолор" садржи у свом саставу и гентамицина ексолин (колаген екстракта), који када влажна средина остаје подмладак у будућности Шем слани раствор надут и постала модерна ране слој који обезбеђује добру заштиту од спољног инфекције и брзог исцељења због почетној влажности са структуром.

Полипропилски филмови и салвете са Лита су били слојевити са газним завојем који су се шивали на кожу пацова за трајнију фиксацију. Сваки пацов је био посадјен у засебном кавезу, како би се створили оптимални услови за његово одржавање и узимање трансплантираних кератиноцита. Завоје ратс сваки дан неколико пута да пресађене суспензију и вишеслојне језеро епидермотситов схот Диспасе, дневно, натопљеном стерилног сланог раствора да створи најповољније услове ћелије за прихватања калема. С обзиром на то да је филм "Полипор" био непропустан за воду, пацови друге групе нису влажили облоге, што је била једна од предности у односу на трансплантацију без филмова. Након 10 дана, завоји су уклоњени. Клиничка слика ожиљака након трансплантације ћелија није се много разликовала од ожиљака без трансплантације, осим за више розе боје (због дермабразије) и већег пилинга. Ова чињеница то сугерише. Да је одмах након нестанка облога за ране са ИПЦ, у рушевинама није било никаквих промена.

Узимање биопсијског материјала у пацовима.

После 1, 2, 5 и 9 месеци после преношења алогичних кератиноцита пацова у оштре беле пацове, материјал је узет за хистолошки, цитоморфолошки и електронски микроскопски преглед. Као контролни узорци нормалне коже и ожиљака пацова узети су без трансплантације ћелија. Анестезија код пацова обављена је са етерном анестезијом.

После анестезије, из означених подручја, у које су трансплантирани кератиноцити, биопсија је пробушена са пречником од 2 мм. Комади ожиљних ткива су узети и постављени у 2,5% раствор глутаралдехида за припрему материјала за електронску микроскопију. Комади ткива узимају за хистолошког испитивања су постављени у 10% раствору формалина неутрална, затим кроз ожичење алкохола и испуњена у парафин, затим сечења ултратанких преграда и њихово гледање под микроскопом светло-оптицал.

Контрола И. Нормална кожа пацова.

Да би се видела разлика између микроскопске слике нормалног ожиљка коже пацова и ожиљака у одређеним временима након ИПЦ трансплантације, приказане су фотографије и описи за њих у свим фазама ове студије.

Епидермис нормалне коже састоји се од 7-9 слојева ћелија. Хорни слој умерене дебљине. У мјестима се састоји од 6-8 слојева усне скале. Базални слој представља ћелије цилиндричног облика са великим светлом, редовним језгрима и неколико нуклеола. Десмосомне везе између ћелија и базалне мембране су јасно изражене. Под добро дефинисаним базалне мембране која има фини избочинама у субепидермал слој лажи паралелно са благим свежњева колагена и еластина влакана, укључујући издужених фибробласта, малим пловилима. У дубљим слојевима, снопови колагена и еластинских влакана леже у различитим правцима. Међу њима постоји много посуда са танким зидовима истог калибра, ћелијских елемената (фибробласта, мастоцита, леукоцита). У великом броју фоликула за косу, лојних жлезда.

Контрола 2. Ожиљак пацова 2 месеца.

Клиничка слика. Ожиљци бледо ружичасте, са пилингом, на местима где остају коријени. Њихова површина је смањена због контракције колагених влакана и постају око 3,0-3,5 см ^:. Додаци за кожу су одсутни.

Микроскопска слика. Епидермис се састоји од 3-5 слојева ћелија, плисе, представљених са заобљеним базалних ћелија, један ред ушиљен, 1-2 редови кератохиалин грануле житарицама у горњем слоју постоје делови интрацелуларне едема. Рожени слој се хетерогено мења од веома танке до згушњавајуће. Постоји преклапање румена због (контракције) ожиљака. Баци се пенетрирају до папиларног слоја и дају утисак папилеа. Граница између епидермиса и дермиса је равна линија. Базална мембрана се не може пратити свуда. У доњем делу подепидермалних и дубљих слојева - посуде са дебелим, ошамућеним зидом, многи напуштени, са стазним феноменима. Око посуда - кластер макрофага, фибробласта. Макрофаги окружују еритроците који настају из капилара и фагоцитирају их. У површинским слојевима - мале капиларе. Под епидермисом, колагенска влакна су слободна. У дубљем слоју румена - грубих снопова колагенских влакана међу којима је много фибробласта.

Шарење пацова месец дана након трансплантације МПАл рататих кератиноцита.

Клиничка слика. Ожиљци розе, њихова површина се смањила, посебно у пречнику и у просеку 2,5-3 цм ². Коса и лојна жлезда су одсутни.

Ови микроскопски преглед материјала добијеног од пацова са трансфер МПАлК МПАлК на филму и подлоге без суштинског идентични. Међутим, технички, рад са МПАлК подржан много теже и мукотрпан него када се узгаја МПАлК на подлогу, тако да даља истраживања овог питања на трансплантацију кертаинотситов ожиљци смо користили као основа за узгој ( "подлоге") слојевита травњака.

Микроскопска слика. Постоји загушење епидермиса на 15-20 слојева, готово до средине од којих кератиноцити имају уски, издужени, вертикални облик и компактан аранжман. Базалне ћелије су распоређене у неуједначеној линији. Њихова језгра су лагана, велика, округлог облика са једним или два нуклеола, што указује на њихову високу синтетичку и пролиферативну активност. Граница између епидермиса и дермиса је равна линија. Трњави слој је добро развијен, састоји се од 3-5 слојева ћелија округлог облика, постоје 2 ћелије нуклеолуса.

Одмах испод мембране - плотнорасполозхенние танке снопове колагенуосов влакна паралелно са великим бројем судова запустевсхих дубље влакна колагена грубља прикупљене у уске снопове. Многе велике фибробласте, мастоцити (2-3 у виду вида), макрофаги, леукоцити и празне посуде, чији су зидови отпуштени, око њих су лабаво лоцирана колагенска влакна. У неким пловилима - стазу, диапедеза униформних елемената. Око посуда - фибробласти, појединачни лимфоцити. Додаци за кожу су одсутни.

Када се суспензија кератиноцита трансплантира до полираног ожиљка, микроскопска слика се разликује од претходне. Код већине животиња - епидермис је танак, састоји се од 5-6 слојева ћелија. Доњи слој састоји се од ћелија неправилног, полигоналног облика са заобљеним неправилним обликованим језгром. Стање субепидермалног слоја је слично ономе у групи животиња без трансплантације.

У овом случају, може се говорити било кашњење процеса који прате трансплантацију ћелија, или великог губитка ћелија трансплантираних у облику суспензије. Стога је дошло до закључка да је корекција ожиљака трансплантацијом кератиноцита у облику суспензије неадекватна.

Шарење пацова 2 месеца након трансплантације МПАл ратних кератиноцита.

Клиничка слика. Ожиљак изгледа танак, нежан. На местима постоји екизија, ваге.

Микроскопске слике. Стратум цорнеум је згушњен, на местима - хиперкератоза. Епидерм је згушњен, састоји се од 12-20 редова ћелија. Граница између епидермиса и дермиса је равна линија. Деликатна колагенска влакна испод епидермиса су прилично чврста. У дубљим слојевима рупа прикупљају се у грубим великим сноповима. У субепидермалном слоју појављује се нова формација пловила. У доњим слојевима ожиљних ткива - пуно празних посуда, смештених паралелно са површином епидермиса. Велике фибробласти су равномерно распоређени у дебљини руба, постоје огромни, вишеструки, многи макрофаги.

Шарење пацова 5 месеци после трансплантације МП из спермоцита пацова.

Клиничка слика. Ожиљак изгледа глатко, глатко, без пилинг, има длака на свом веће густине на периферији ожиљака, што указује периферних урођене фоликула у преџелуцима и неоплазме фоликула длаке. Површина ожиљака наставља да се смањује.

Микроскопска слика. Епидермис је и даље дебео (15-20 слојева, понекад и до 30) у горњим слојевима испуњен је зрном кератогиалина. Базална мембрана је јасно видљива. Под њеним колагенским влакнима леже слободно. У доњим слојевима - колаген је снажнији и чврсто упакован. Међу гредама колагена има много капилара .. У горњим слојевима смањен је број празних судова. Епидермис и дермис су благо таласасти. У ожиљном ткиву долази до дубоких епидермалних раса. Међу колагенским влакнима су видљиви новоформирани судови. Појављују се појединачни фоликули косе и лојне жлезде.

Шарење пацова 9 месеци након трансплантације епидермоцита пацова ратова.

Клиничка слика. Ожиљци су постали знатно мањи у поређењу са ранијим условима, њихова површина је у просеку око 1,5-2,0 цм ². Ожиљци су неравномјерно прекривени танком косом, посебно око периферије. Задржава се мала скалирања малих плоча.

Микроскопска слика.

Епидерм је постао тањи, представљен од 6-8 редова ћелија, подсећа на епидермалну структуру нормалне коже пацова, само густину ћелија за 1 мм. Веће и мање су. Базални слој се састоји од малих ћелија округлог цилиндричног облика. Базална мембрана је добро дефинисана, хемидозмоми су јасно видљиви. Запажено је присуство епидермалних раса у субепидермалном слоју. Папиларни слој се изражава дуж целе дужине ожиљака. Ове чињенице показују да је за овај период адхезија трансплантираних кератиноцита постала знатно јача са ткивима ткива румена. Сходно томе, брига о ожиљцима особа са трансплантацијом МАЛЦ-а 9 месеци након ИПЦ трансплантације може бити традиционална. Под епидермисом су деликатнија колагенска влакна него у дубоким слојевима. Било је много бродова, нарочито површно лоцираних. У већим бродовима, зидови су изгубљени. Фоликули косе и лојне жлезде у великим количинама. Микроскопски узорак подсећа на кожно ткиво.

Резултати експерименталног рада и њихове дискусије.

Током овог рада на вештачке коже ожиљака пацова након операције дермоабразијом, трансплантираних кератиноцита у разним формах- он рана површинама, као суспензија у цамбриц и слојевитим формирање без подлоге. Рад је обављен да би се добили морфолошки подаци о ефектима трансплантираних алогених кератиноцита на ожиљке, као и одређивање оптималних варијанти трансплантата.

Утврђено је да су све три методе трансплантације стварне, али трансплантација ИПАА без супстрата је веома тежак поступак, током којег се може повредити ИПАЦ, што утиче на резултате трансплантације. Штавише, овај начин трансплантације искључује рад на великим површинама.

Трансплантатион кератиноцита суспензија - знатно економичнија метода не захтева дуго култивисања ћелија и једноставно у садашњем решењу, контакте користећи стерилне цамбриц предформи, чије димензије одговарају вредности ожиљака. Застој терапијског ефекта током трансплантације ћелијске суспензије за око месец дана у поређењу са МИЦ-ом на превлаку ране није значајан тренутак током трајања лечења, израчунат у неколико мјесеци. Познато је да је приликом трансплантације ИПЦ за спаљивање пацијената трансформација стања кожне структуре постојала постепено и неколико година. Трансплантација културе кератиноцита на покривачима рана је најподеснија и обећавајућа метода, али је и много скупља. Поред тога, захтевајући данас за потрагом за софистицираним премазима који морају бити пластични, хигроскопни, имају бактериостатске или бактеријске карактеристике и биолошки неутрални за ћелије. Филм "Полипор" - интермедијера верзија домаћег филма ране покривености, упркос неким недостацима, нас је дозвољено да студирају експериментално кератиноцита трансплантација пацове на ожиљке и извући закључке о ефикасности овог ожиљака правац привлачење.

Аутори који обављају трансплантацију на ИПЦ ране спаљене, истакао да је током прве недеље након трансплантације вишеслојне резервоара кератиноцита на рану прегледа истаћи, епидермис згусне и слојевита. Сви слојеви епидермиса били су добро дефинирани. Интересантно је да је број слојева ћелија у трансплантацији 10-30% већи него код узорака биопсије коже. Аутори су приметили појаву гранула кератогиалина 5-ог дана након трансплантације МПА, базалне мембране и хемидозмозома - већ трећег дана.

Ј.Ривес ет ал. (Л994), Парамонов БА (1996); НМ Кузнетсов ет ал. (1998) су утврдили да током раних периода након трансплантације БМД пацијената са полнослоиними дефекти коже после опекотина, комуникација између дермиса и епидермиса је веома слаба и права линија, папиларни слој је одсутан. До краја другог месеца почиње формирање плитких папили и додаци коже, веза између дермиса и епидермиса постаје трајнија. Подаци о литератури говоре о трансплантацији алогених кератиноцита на ране запаљених пацијената, као обећавајуће методе. Упркос чињеници да је одбацивање алогене кератиноцита јавља поднела различитих аутора у периоду од 10 дана до 3 месеца, међутим, имају улогу у зарастање ране површине, ослобађајући фактори раста и механички затварање квар. Верује се да МПАЛК има смањену антигенску активност, јер током ин витро култивације Лангерхансове ћелије губе, што им омогућава да дуго постоје у организму примаоца. Поред тога, алогенска култура добијена од коже младих здравих људи има неупоредиво већи биолошки потенцијал од аутологне културе пацијената након трауме.

Главни циљ наше студије био је да се утврди да ли ће алогени кератиноцити преживети на ожиљцима и какве ће бити промене у ожиљном ткиву под утицајем таквог биолошки активног "превлака ране". У случају позитивног резултата, израдите најефикаснију и најмању радну интензивну технологију у овој области рехабилитационе медицине.

Подаци које смо добили у многим погледима показали су се сличним податком о литератури о морфолошким промјенама које се јављају у људском епидерму након преноса алогених кератиноцита на спаљивање рана. Али постоје значајне разлике, како у погледу морфолошког супстрата, који се трансплантира, тако иу погледу технологије. Тако. Формирање базалне мембране и дерма-епидермални везе (полудесмосом, папила) јавља касније у поређењу са преносом кератиноцита рану површинама без ожиљака. Изгледа да је то због лоше исхране ручних ткива у односу на дермис или мишићну фасцију. Ожиљак, нарочито стари, је густо везивно ткиво са врло малим бројем посуда, дно ране је горње гранулацијско ткиво богато крвним судовима. Стога је очигледно да су услови под којима се трансплантација и зарастање кератиноцита јавља потпуно другачије. Што је васкуларизовано подручје трансплантације ћелија, то је лакше обрадити. Из овог постулата постоји закључак о томе да се ради о младим ожиљцима, у којима је везивно ткиво и даље довољно слободно и богато крвним судовима.

Као резултат овог експерименталног рада, доказано је да:

1. Могућа је трансплантација МАЛК-а на ожиљке. 
2. Оптимална метода трансплантације је трансплантација кератиноцита на покривачу ране.
3. Површина ожиљака треба се бацати помоћу оперативног дермабразија коришћењем Сцхуманновог ласера или ножа.
4. Под утицајем МПАЛК-а, јавља се брза епителизација површине тла.
5. Боље васкуларизовано ожиљно ткиво, то јест, млађи ожиљак, то боље резултате трансплантације кератиноцита.
6. Ожиљно ткиво под утицајем трансплантираних кератиноцита постепено се преображава и претвара у дермално-сличне (оштрије ткиво ожиљака са додацима коже).
7. Постепено отпуштање ткива ожиља почиње са субепидермалним слојем. Побољшава његову васкуларизацију, снопови колагенских влакана у горњим и доњим дијеловима румена узимају много крхку локацију него у ожиљном ткиву без трансплантације ћелија. Постоје фоликули за косу и лојнице. Епидермис у својој структури, након проласка фазе хипертрофије, приближава се епидерми нормалне коже.
8. Посматрани Промене се односе на кератиноците луче факторе раста, цитокина који побољшавају трофизма ожиљак доприноси његову трансформацију из крутог влакнастим ткивом у опуштенијим, што доводи до побољшања ожиљка.

Тако се, на основу ове студије, може закључити да је корисни ефекат трансплантираних кератиноцита на ткиво ожиљака, што би могло бити од практичног значаја за рехабилитацију пацијената различитих врста ожиљака.

Овај рад на пацовима такође је омогућио формулисање захтева. За облоге ране, на којима се узгајају кератиноцити.

Облоге од ране треба да буду:

• биокомпатибилан са ћелијама,
• бреатхабле,
• имају еластичну форму,
• бити хидрофилни,
• јер лекови адитиви садрже антибактеријске лекове и антиоксиданти нису отровни за култивисане ћелије.

Клинички резултати биотехнолошког третмана ожиљака.

Раније, Н. Царвер и сар. (1993) открила је да су оклузивни преливи најбољи за везивање на рану и преживљавање кератиноцита, али не дозвољавају формирање стратификованог (зрелог) епидермиса. За формирање стратификованог епидермиса неопходно је ваздушно окружење. Због тога је након постављања вишеслојног слоја предложено оклузивно покривање ране након 7-10 за уклањање и понашање рана под сувим завојима или мастима који су растворљиви у води. Можемо рећи да су квалитет и својства "подлоге" на којима се гајене ћелије веома важне за ефикасност трансплантације ћелијског материјала, а самим тим и за резултате рада доктора. Али, идеалан рана прелив за данас није, упркос обиљу предложених опција (вештачка кожа, не тканине од карбоксиметил целулозе, фибрин премаза, полупродувни полиуретански филм). Није битан тренутак у овом питању трошак "подлога" (специјалне премазе ране), пошто њихови високи трошкови повећавају укупне трошкове биотехнолошког третмана.

Ефикасност ћелијских технологија је до сада доказана, али, нажалост, ове технологије су веома скупе, нарочито у земљама где индустријска производња ћелијских композиција није успостављена. Ипак, земље као што су Сједињене Државе већ дуго су основале индустрију за производњу ћелијског материјала за трансплантацију спаљених. Посебно, компанија БиоСурфаце Инц, од 1989. Године, подигао 37.000 плочастих слојеве кератиноцита, који се користе за лечење пацијената 240 у 79 земаља широм света (Р.Одессеи, 1992) са 1 цм ² култури ћелија кошта око 7-8 $ УС.

Технологија лечења различитих болести и проблема са кожом има бројне разлике, али у срцу било ког третмана са ћелијама је производња квалитетног ћелијског материјала и његова трансплантација.

Овај процес се састоји од следећих корака:

• избор коже од погођених (или од донатора),
• транспорт флапова коже у биотехнолошки центар,
• изолацију ћелија базалног слоја и њихово множење,
• изградња вишеслојних слојева кератиноцита (ИПЦ).
• трансплантација ћелијских култура.

Главни проблем у лечењу трансплантације вишеслојних слојева кератиноцита је потреба за одрживим ћелијама у свим фазама трансплантације ћелија. Делови коже за изолацију аутологних или алогених ћелија треба да буду што тањи, јер се у овом случају лакше одвајају коришћењем механичких и ензимских метода и добијању суспензије ћивих ћелија за раст. Могу се добити одрезивањем дерматома или употребом коже очних капака, кожне коже, унутрашње површине рамена. С обзиром на то да су ћелије осетљиве на халогене (хлор, јод), водоник-пероксид, они се не могу користити у третману коже приликом узимања материјала.

Квантитативни и квалитативни принос ћелија од кожних графта и ефикасност њиховог узгоја такође зависе од здравственог стања и старости донатора. Осим тога, узорке биопсије коже треба доставити у лабораторију што је прије могуће иу одговарајућим условима (околину, температура) доставити у сертификовану и акредитовану лабораторију.

Еагле-ова средња или средња 199 са додатком 10% говеђег серума, ДМЕМ медијум који је допуњен са 5% феталног говеђег серума и антибиотика може се користити за чување и транспорт лопатица коже.

У цитолошком лабораторија дермалном биопсијом прво механицки раздвојени у мале комаде, затим лечење кожних делове применом ензима: трипсина, колагеназе, Диспасе и друге.

Под дејством ензима се дешава деструкција десмозома, а кератиноцити се издају у медијум као одвојене ћелије или агрегати који се састоје од различитог броја ћелија. За културу се користе само базални кератиноцити који се узгајају на специјалним медијима у инкубаторима који садрже 5% ЦО, у петријевим посуђима или у бочицама на т = 37 ° Ц. У року од 48 сати, примећује се настанак кератиноцитних колонија, који се постепено конвергирају у монослој. После добијања довољног броја ћелија, добијена суспензија се шири на покривачима за ране припремљеним за ову сврху и постављена у посуде Петри. Од суспензије, прво се формира моноламин, а затим вишеслојни слој кератиноцита. Шематски, фазе процеса култивације кератиноцита су приказане на Сл. 12 (33.43.54.65).

Формирање вишеслојне формације кератиноцита погодне за трансплантацију обично траје 7-10 дана. Понекад је овај период дужи, што зависи од квалитета изворног материјала (старост, здравље донатора, исправност материјала, квалитет употребљених медија итд.). Ако вишеслојни слој прелази, онда на њеној површини могу бити ћелије са појавама апоптозе неприкладним за трансплантацију. Петри посуђе, са њима се узгаја на покривачима ране вишеслојним слојевима кератиноцита (ИПЦ), испоручују се у клинику у посебним контејнерима на температури која није нижа од + 15 ° Ц.

Модификовани Греенов метод за раст ИПЦ-а

У нашем раду као пресвучење ране користили смо вишеслојну камеру, напуштајући полипоре филмове са којима смо почели да радимо у експерименту са пацовима. Дакле, вишеслојни слојеви кератиноцита су нас узгајали на префат и стерилном батисте, иако то није оптимално покривање ране.

Клиничке студије су спроведене на волонтерима уз поштовање неопходних етичких норми: потписивање уговора и сагласност на информисање.

1. Примијењена је култура властите (аутологне) и узете из ћелија банкица (алогени) кератиноцити.
2. Сопствени кератиноцити су добијени из комада коже исечене са унутрашње стране рамена пацијената.
3. Рад дермабразије ожиљака обављен је помоћу термооуплинга, ротационих дискова и ербијумског ласера.
4. Узете су групе болесника са нормотропним, хипотрофичним и хипертрофичним ожиљцима.

Технолошки процес примене ћелијске технологије за побољшање врсте ожиљака у кожи састојао се од следећих фаза:

1. Избор пацијената.
2. Објасните суштину лечења, време добијања очекиваних резултата, потписивање уговора и сагласност на информисаност.
3. Именовање пацијената 2-3 седмице пре операције селмевит за 1т. 3 пута дневно, зинктерал на 1т. 3 пута дневно.
4. Узимање комада коже дужине 2,0 цм и ширине 0,7-1,0 цм од унутрашње површине рамена, високо, готово на дну аксиларног региона, за добијање аутологних кератиноцита.
5. У случају квара пацијената у сопственим избором кератиноцита услед могућности добијања линеарну ожиљак на унутрашњој површини рамена, ћелијски материјал је узет из банке ћелија (алогеној кератиноцита).
6. Кератиноцити су изоловани и гајени у условима лабораторије сертификоване за ову врсту посла.
7. После добијања ИПЦ који је био довољан за трансплантацију, дан операције је примењен у ожиљке на клиници, где је материјал доведен у посебне посуде у петријевим јелима.
8. Дермабрасион операција изведена румен хемостаза терен површина је испран стерилног физиолошког раствора, сушен, након чега измештен у стерилним ИПЦ цамбриц "ћелија доле." То јест, ћелије које су биле горње у МИЦ-у биле су ниже, у близини сјајне површине.
9. На врху је постављен стерилни филм који је фиксиран на кожу са еластичним завојем или Омнифик еластичном траком. Уместо филма, могу се користити и индиферентне превлаке ране које садрже силикон, на примјер Мепител, Мепиформ, плоче с силиконским гелом.

После 5-7 дана уклања се филм или силиконски премаз. До овог тренутка, сви кератиноцити морају пузати на полирани ожиљак и причврстити се на његову површину.

10. Влажна средина створена под филмом и силиконским премазом активно доприноси томе. Баптист који остаје на ожиљу од ове тачке може бити импрегниран куриозним или цитозан гелом. Као резултат тога, другог дана створена је густа коре, која је, због погодности пацијента, боље поправити еластичним, прозрачним гипсом, на пример Омнифик. Дишећа коријена омогућава новоформираним епидермима да се разликују и постану зреле особе.

У зависности од врсте ожиљка и дубине брушења, облачење се одбија након 8-10 дана. Епидермис у овом тренутку има 30-40% више ћелијских слојева него код нормалне коже. Базална мембрана се не формира. Кератиноцити згушњавог епидерма ослобађају масу биолошки активних молекула у ожиљно ткиво.

Успех биотехнолошког лечења ожиљака у великој мјери зависи од начина на који се зарађује у постоперативном периоду. Ћелијске културе су "нежна" врста покривача ране иу раним периодима после трансплантације, БМД се лако може одвојити од основних ткива. Због тога се пацијентима саветује да се брину о ожиљу после операције. За 8-9 месеци немојте трљати и лако радити са хладном кувано водом како бисте избегли отклањање танког, новооснованог епидермиса који нема чврсто држање са основним ткивима.

Напомена:

Пре операције и током употребе Дермоабразија халогенованих оксиданата и конзерванса (иодопирон, сулиодопирон, иодинол, иодинат, хлорхексидин, водоник пероксид) је дозвољено пре пресађивања клеток- апсолутно контраиндикована због њихових цитотоксичне ефекте. Отрован за ћелије такође је метилен плава. Брилијантно зелено.

Да би се избегла инфекција, нарочито када се ради са хипертрофичним ожиљцима, могуће је третирати оперативно поље са неомицин сулфатом, полимиксином или гентамицином. Они не врше цитотоксични ефекат на кератиноците.

Као резултат овог третмана постиже се троструки ефекат.

1. Усаглашавање површине румена.
2. Направите слој изнад њега новог епидерма, нормалне дебљине.
3. Конверзија ожиљка у дермоподобнуиу дејством цитокина, фактора раста и других биоактивних молекула луче би трансплантованих ћелија и кератиноцита стимулисане код њих, фибробласта и макрофага.

Ожиљак постаје мање приметан, у њему се појављују еластичније, појављују се поре, пигментна коса, пигментација се може вратити због присуства меланоцита у МПЦ.

Међутим, сви ови позитивни моменти у цицатрику не долазе одмах. У том смислу, неопходно је упозорити пацијенте. Да је процес трансформације ожиљних ткива у дермис спор и оптимални резултат таквог лечења може се очекивати не пре 10-14 месеци. Одмах након одбацивања завоја, полиране површине имају изражен полихром, светлији процес брушења. Најмања оштећења на кожи настају приликом брушења нормотропних ожиљака са ербијумским ласером. Боја ожиљака и околне коже обновљена је у периоду од 3 до 8 недеља. Упркос таквим мјерама предострожности, понекад постоји постоперативна хиперпигментација која може трајати неколико дана самостално.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]