Месенцхимал матичне ћелије

Међу регионалним матичним ћелијама, мезенхималне матичне ћелије (МСЦс) заузимају посебно место, чији деривати чине стромални матрикс свих органа и ткива људског тела. Приоритет у истраживању МСЦ припада представницима руске биолошке науке.

Средином прошлог века, хомогена култура мултипотентних стромалних матичних ћелија коштане сржи је прво изолована у лабораторији А. Фриеденсхтеина. Мезенхијалног матичне ћелије везани за субстрат дуго времена задржала високу стопу пролиферацију, и културе у ниској густини сетве после фиксације на супстрату формираним од фибробласта клонова који немају фагоцитним активност. МСЦ пролиферација Стоп завршили спонтано диференцијацију ин витро у ћелије костију, масних, хрскавице, мишића или везивног ткива. Даља истраживања открила остеогени потенцијал фибробласта-лике коштане сржи стромалних ћелија различитих врста сисара, као и активност које формирају колоније. У експериментима ин виво је показано да су хетеро- и ортотопска трансплантације фибробласта које формирају колоније ћелија завршено формирање кости, хрскавице, и влакнасте масног ткива. Од стромалног матичних ћелија коштане сржи карактерише висок капацитет за само-обнављање и диференцијације контрапункта у оквиру исте ћелијске линије, они се називају мултипотентне мезенхимална родитељских ћелија.

Треба напоменути да за 45 година фундаменталних истраживања мезенхималних матичних ћелија створени су стварни услови за кориштење њихових деривата у клиничкој пракси.

Данас нема сумње да су сва ткива људског тела формирана из матичних ћелија различитих ћелијских линија као резултат процеса пролиферације, миграције, диференцијације и сазревања. Међутим, у скорије вријеме веровало се да су матичне ћелије у телу одрасле особе специфичне за ткиво, односно способне да производе специјализоване ћелијске линије само ткива у којима се налазе. Ова концептуална ситуација одбачена је чињеницама о трансформацији хематопоетских матичних ћелија не само у ћелијске елементе периферне крви, већ иу овалне ћелије јетре. Уз то, и неуронске матичне ћелије су могле да доведу до стварања неурона и глиалних елемената, као и раних посвећених линија хематопоетских прогениторских ћелија. Заузврат, месенцхималне матичне ћелије, које обично производе ћелијске елементе кости, хрскавице и масног ткива, могу се трансформисати у неуронске матичне ћелије. Претпоставља се да у процесу раста, физиолошког и репаративног регенерације ткива, непокретне прогениторске ћелије генеришу се из резерви стемова специфичних за ткиво. На пример, поправљање мишићних ткива се може реализовати помоћу мезенхималних матичних ћелија које мигрирају из коштане сржи у скелетне мишиће.

Иако такви цросс замјењивости матичне ћелије препознају не све истраживаче могућност клиничког употребе мезенхималне матичних ћелија као извор ћелија трансплантације и ћелија вектора генетску информацију није спорно као мултипотентне строме коштане сржи матичних ћелија, које могу бити релативно лако изолују и пропагирају у култури ин витро. У исто време у научној литератури и даље појављују извештаји о потенцијалу плурипотентних матичних ћелија строме коштане сржи. Као доказ презентовани истраживања протокола, која под утицајем специфичних индуктора трансдифферентиатион од МСЦ се претварају у нервне ћелије, кардиомиоцитима и хепатоцита. Међутим, неки научници прилика да се поново активирање и експресија гена током раног ембриогенеза у озбиљне сумње. Истовремено, свако разуме да ако се налазе услови да се прошири мултипотентне мезенхимална матичне ћелије плурипотенцију на ЕСЦ у регенеративне медицине и пластике аутоматски решити многе проблеме етичког, моралног, верске и правне природе. Поред тога, пошто у овом случају извор матичних регенеративног капацитета пацијента су аутологне стромалних ћелија је решен и проблем имуног одбацивања ћелија трансплантације. Колико су ове перспективе стварне, ближња будућност ће показати.

[1], [2]

Употреба мезенхималних матичних ћелија у медицини

Употреба клиника деривата месенхималне матичних ћелија је повезан првенствено смањењем дефеката ткива проузрокованих обимним и дубоким термичких лезија коже. Преклиничка експериментална процена прикладности алогеној фибробласта-лике мезенхималне матичних ћелија за лечење дубоких опекотина спроведена. Показало се да су коштане сржи мезенхималне матичне ћелије фибробласта попут формирају монослој у култури, који омогућава да се пресадити да оптимизују регенерацију дубоких рана опекотине. Аутори напоменути да сличне особине имају ембриона фибробласта, али клиничка примена другог је ограничена на постојећим етичких и правних проблема. Дубока термална опекотина са оштећењем свих слојева коже моделирана је на Вистар пацовима. Површина опекотина износила је 18-20% укупне површине коже. У првој експерименталној групи која се састоји од пацова са дубоким термичком повредом и трансплантацији алогених фибробласта мезенхималним матичним ћелијама. Другу групу чине животиње са дубоким термичким опекотинама и транс-плантажа алогенеичне ембрионалних фибробласта. Трећу групу су представљали контролни пацови са дубоким термичким опеклинама, који нису спроводили ћелијску терапију. Суспензија фибробласта месенхималне матичних ћелија и ембриона фибробласта је нанет опекотина рани је површина пипетом у количини од 2 × 10 ⁴ ћелија на 2. Дана након исецања опекотине моделирања и некротичном есхара формирана. Након трансплантације, ћелије сагоревају површину прекривену газом натопљеном изотонични раствор натријум хлорида са гентамицина. Фенце ћелије коштане сржи за добијање МСЦС са затим се индукује фибробласта линије у месенхималне матичних ћелија произведених у Вистар пацова из фемура. Плућа фетуса фибробласти добијени од 14-17 дана ембриона. Ембрионални фибробласта и коштане сржи ћелије добије пре-МСЦ су гајене у петри шољама на 37 ° Ц у Ц02 иикубаторе, у атмосфери са 5% ЦО2 на 95% влажности. Ембрионални фибробласти су култивисани током 4-6 дана, док за формирање монослоја МСЦ тражи од 14 до 17 дана. Накнадно МСЦ одржава криопрезервација као полазни материјал за фибробласта мезенхималне матичних ћелија које су припремили отапање и гајења МСЦ 4 дана. Број фибробласта генерисан месенхималне матичних ћелија је више од 3 пута већи број ембриона фибробласта који се јављају током истог периода култивисања. За идентификацију ћелија у транстслантированних спали ране у кораку култивисање њихов геном обележено помоћу вирусног трансфер вектора заснована на рекомбинантни аденовирус В типе царриер 1ас-2 гена кодирање СС-галактозидазу Е. Цоли. Живе ћелије при различитим временима после трансплантације детектован имунохистохемијски у цриосецтионс додатком супстрата Кс-Гал, дајући карактеристичан плаво-зелену боју. Као резултат визуелне динамике, положајне и хистолошког евалуацију стања рана опекотина, утврђено је да чак и на 3. Дан након трансплантације ћелија у изолованим групама појављују значајне разлике током ране процес оздрављења. Посебно се разликује, ова разлика је постала седми дан након трансплантације ћелија. Животиње прве групе, који су пресађене фибробластне-лике мезенхималне матичних ћелија, рана стекли равномерно ружичасте интензивну боју, гранулација ткива расла током свог целокупног области на нивоу епидерма, и спали површину је знатно смањен у величини. Неколико формирана тањи колагена филм на рану површину, али је она наставила да покрије целу површину опекотине. Животиње из друге групе, који су трансплантације ембриона фибробласта, гранулације ткива се подиже на нивоу епидерма од ивица ране, али само на неким местима, у исто време плазмореиа од ране био интензивнији него у групи 1, а у почетку формира колагена филма практично нестала. Код животиња које нису добиле терапије матичним ћелијама, на 7. Дан спаљивања рана је бледо, коштица, мртво ткиво, пресвучена фибрин. Плазморја је примећена током целог пламена. Хистолошки, животиње од 1. И 2. Група показала смањење ћелијске инфилтрације и развоја крвних судова, ови знаци почетној процеса Регенератор су оштрије код пацова у групи 1. У контролној групи показује знаке ћелија рану инфилтрације, Хистолошка образац новоформираних крвних судова одсутне. 15-30 тх дан посматрања животиње из 1. Групе опекотине површине био значајно мањи него код пацова других група и гранулацију површина је развијенији. Код животиња на 2. Групног бурн површине такође смањен у односу са величином рана гори у контролној групи пацова која је била због маргиналне епителизације. У контролној групи бурн површина локације је остала бледа гранулације са ретки, појављују томе паук вена, острвца су фибринозан плоча наставио умерен плазмореиа преко опекотине површине, нешто што је тешко одвојити никакви остао. Уопштено, животиње групе 3 такође смањује величину ране, али је рана остала подритими ивицу.

Тако, током компаративне студије зарастања рана стопа коришћењем фибробласта мезенхимална матичних ћелија и феталних фибробласта, без употреба ћелијској терапији означен убрзање зарастања опекотина површине као резултат трансплантације фибробласта месенхималне матичних ћелија и ембрионске фибробласта. Међутим, у случају коришћења алогених мезенхималне матичних ћелија фибробласта зарастање рана стопа био већи него у трансплантацији ембрионалних фибробласта. Ово је манифестује у убрзаних промјена обнављања фаза процеса - да се смањи ћелијске инфилтрације периоде, повећава стопу пролиферације васкуларних мрежа, као и формирање гранулације ткива.

Резултати динамичке планиметрије указују на то да је стопа спонтаног зарастања ране сагоревања (без употребе ћелијске терапије) најмања. 15. И 30. Дана после трансплантације алогене мезенхималне матичним ћелијама фибробласта зарастање рана стопа је виша него у трансплантацији ембрионалних фибробласта. Хистохемијска метод за детекцију бета-галактозидазу показало да након трансплантације фибробласта-лике мезенхималне матичних ћелија и ембриона фибробласта током целог периода посматрања на површини и дубоких регенерисање рана пресађене ћелије остају одржива. Аутори указују да већи стопа ране регенерације опекотина користећи мезенхимална матичних ћелија фибробласта условљеног пуштање ових ћелија током сазревања ростостимулируиусхих биоактивних фактора.

Аутологне трансплантације или алогеној кератиноцита и алогене фибробласта за лечење рана опекотина и користи у клиници. Треба напоменути да је хируршки третман деце са огромним дубоких опекотина је компликован задатак због високог мноштва трауме и хируршких интервенција, значајног губитка крви, на различитим реакцијама који се користе за инфузију медији. Главне потешкоће у спровођењу коже и пластичне хирургије са обимним дубоких опекотина, површина прелази 40% површине тела, због озбиљности њеног стања и недостатка средстава донатора коже. Употреба мрежних калемова са великим односом перфорације не реши проблем, јер је слика након епителизируиутсиа ћелија перфорација је веома спор, а често пресађивање коже су растворене или суво. Такве превлаке бурн ране као ксенокозха, Цадавериц алографте, синтетички филм облоге нису увек довољно ефикасне, па развој нових метода за затварање бурн површинских слојева културама кератиноцита и фибробласта. Посебно, поступак затварања опекотине површине уз културан аллофибробластов обезбеђивање током трансплантације изговара стимулаторни дејством на пролиферацију епидермотситов сачуваном на граници рану код опекотина, ау кератиноцита графт месх ребара. У Будкевицх Л. Ет ал (2000) показују резултате примене ове методе за лечење опекотина код деце. Испитивано је 31 дјеце са термичком траумом од 1 до 14 година. У троје деце, укупне површине спали ране ИИИ-Б - ИВ степен је 40%, 25 - 50-70%, чак и на три - 71-85% површине тела. Еарли хируршки нецрецтоми комбинацији са трансплантацијом култивисаних аллофибробластов и аутодермапласти. У првој фази лечења је спроведено некротично исецање ткива, други - на трансплантацији гајеним аллофибробластов носача филма, трећи (48 сати након трансплантације култивисане аллофибробластов) - уклањање ламеле матрице и коже са аутодермопласти перфорације однос 1: 4. Три пацијента у болници са тешким обољењем опекотине, културан аллофибробласти су пресађено на гранулацију ране. Трансплантација култивисаног аллофибробластов обавља једном у 18 деце, два пута - на 11, три - два пацијента. Површина ране површине, цлосабле ћелијска култура кретала од 30 до 3500 цм2. Ефикасност култивисаних аллофибробластов процењене укупном проценту прихватања калема од језичака коже, време оздрављења опекотина и броја умрлих тешке термалне повреде. Уплитање трансплантата је завршено код 86% пацијената. У 14% случајева забележено је делимично не појављивање кожних флапсова. Упркос текућем третману, умрло је шест (19,3%) дјеце. Укупна површина лезије коже у њима је била од 40 до 70% површине тијела. Трансплантација култивисаног аллофибробластов имао никакве везе са смрћу опекотина повреда једног пацијента.

Анализирајући резултате лечења, аутори напоменути да су претходне опекотине неспојива са животом, за лечење дубоко топлотну оштећење површине коже 35-40% телесне површине (за малу децу - до 3 године - су критични дубоке опекотине на површини од 30%, за старију децу старост - преко 40% површине тијела). Када је хируршка трансплантација култивисаног нецрецтоми аллофибробластов аутодермапласти и накнадном коже калемова са великим опекотинама, перфорација фактор ИИИб - ИВ степен остају критично, али у овом тренутку постоје изгледи у многим случајевима да спаси живот и таквих жртава. Хируршка нецрецтоми у вези са трансплантацијом култивисане аллофибробластов и аутодермапласти код деце са дубоких опекотина показао се посебно ефикасна код пацијената са узнапредовалим лезија коже са дефицита донаторских локација. Активан хируршки тактика и пресађивање културан аллофибробластов промовише брзу стабилизацију општег стања тих пацијената, смањење броја инфективних компликација опекотине болести, стварање повољних услова за прихватања калема, смањити време за враћање изгубљеног кожу и трајање болничког лечења, смањење учесталости смртних случајева код пацијената са огромним опекотина. Стога, трансплантација култивисаних аллофибробластов затим аутодермапласти флапс коже постиже опоравак код деце са тешким опекотинама, које су раније сматране проклет.

Опште је прихваћено да је приоритет лечење опекотина болести је најпотпунији и брз опоравак оштећене коже да упозори проистичу из овог токсичним ефектима, инфективних компликација и дехидрације. Резултати примене култивисаних ћелија у великој мјери зависе од спремности за трансплантацију самог опекотина. У случајевима трансплантације култивисаних кератиноцита на рану површину после хируршке нецрецтоми призхивлиаетсиа просек од 55% (по области) трансплантираних ћелија, док ране гранулирање прихватања калема стопа смањена на 15%. Стога, успјешно лијечење екстремних дубоких опекотина коже захтијева, прије свега, активну хируршку тактику. У присуству ожиљака ИИИБ-ИВ степена, површина опекотина се одмах ослобађа од некротичних ткива како би се смањили ефекти ињекције и смањили број компликација насталог опекотина. Употреба таквих тактика је кључ за смањење времена од времена спаљивања затварања ране и дужину боравка пацијената са огромним опекотина у болници, али и значајно смањује број смртних случајева.

Први извјештаји о успјешној употреби култивисаних кератиноцита за покривање површине опекотина појавили су се почетком осамдесетих година прошлог вијека. После тога, ова манипулација је спроведена помоћу слојева култивисаних кератиноцита, добијених најчешће из аутоструктура, а много чешће од аллокератиноцита. Међутим, технологија аутокератиноцитопластије не дозвољава стварање ћелијске банке, док је време потребно за производњу довољног пресадка из кератиноцита велика и износи 3-4 недеље. Током овог периода, ризик од развоја заразних и других компликација болести опекотина нагло се повећава, што значајно продужава укупну дужину боравка болесника у болници. Штавише, готово без аутокератинотсити призхивлиаиутсиа трансплантатион фор гранулацију ране опекотине и високи трошкови специјализованих медијумима за раст и биолошки активних стимулатори раста кератиноцита значајно ограничава њихову клиничку примену. Друге биотехнолошким методама попут коллагенопластика трансплантацији ксенокозхи цриопресервед као и коришћење различитих БиоПолимер премаза повећати ефикасност површинску обраду обимних, али не дубоких опекотина. Метода премазивања површине ране са култивисаним фибробластима је фундаментално другачија по томе што главна компонента култивисаног ћелијског базена није кератиноцити већ фибробласти.

Предуслов за развој метода послужила као доказ да перицити које окружују мале посуде су про- гениторними месенхималне ћелије способне да се трансформишу у фибробласта, које производе многе факторе раста и пружају зарастање рана због јаког стимулативног ефекта на пролиферацију и лепљење кератиноцита. Коришћење вештачких фибробласта за затварање рана површина одмах идентификовала је велики број значајних предности ове методе над употребом у култури кератиноцита. Конкретно, припрема фибробласта у култури не захтева употребу посебних култура медија и раста промотера, који смањује трошкове трансплантацијом више од 10 пута Трошкови добијања кератиноцита. Фибробласти се лако подвргнути пасажирањем, током које су делимично губе своје површине хистоцомпатибилити антигена, што заузврат чини је могуће користити за производњу алогене трансплантације ћелија и стварају своје банке. Скраћује примање трансплантација, спремне за употребу у клиници, од 3 недеље (кератиноцита) 1-2 дана (за фибробласта). Примарне културе фибробласта могу се добити култивацијом ћелија из кожних фрагмената узетих у аутодермопласти и ћелија сетве густине по пријему субкултуре хуманих фибробласта само 20 × 10 ³ по 1 цм ².

Да би се испитао ефекат фибробласта и њихових регулаторне протеине у пролиферацију и диференцијацију кератиноцита, упоредну анализу карактеристика и морфологије пролиферације кератиноцита на подлоге типова колагена И и ИИИ и фибронектин у сарадњи култури са хуманих фибробласта. Људски кератиноцити су изоловани од фрагмената коже код пацијената са опекотинама узетим током рада аутодермопластике. Густина кератиноцита износила је 50 к 103 ћелија по цм2. Клиничка ефикасност трансплантације култивисаних фибробласта процењена је код 517 пацијената. Сви пацијенти су подељени у две групе: 1. Одрасли - одрасли погођени опекотинама ИИА, Б - ИВ степен; 2. - деца са дубоким опекотинама ИИИБ - ИВ степен. Процена динамике структурне и функционалне организације монослоја културе фибробласта у вези са улогом у процесу регенерације на глукозаминогликана, фибронектин, колаген, а дозволио ауторима да одреде трећи дан као најповољнијим условима коришћења културама фибробласта за производњу трансплантација. Показало Испитивање утицаја на пролиферацијом фибробласта и диференцијацију кератиноцита да под ин витро фибробласти имају изражен стимулативни ефекат, пре свега на кератиноцита адхезионих процесе, повећавајући број истрајни ћелија и стопу фиксирања више од 2 пута. Стимулација адхезионих процесе праћене повећаном интензитетом синтезе ДНК и степена пролиферације кератиноцита. Надаље, утврђено је да је присуство фибробласта и екстрацелуларног матрикса формира њима је предуслов за формирање тонофибриллиарного апарати кератиноцита интерћелијски везама и, коначно, за кератиноцита диференцијације и формирање базалне мембране. У третману деце са дубоких опекотина успостављена клиничку ефикасност трансплантације аллофибробластов културе, посебно код пацијената са екстензивним лезијама на кожи донатора локацијама у дефицит. Цомплек студи морфофунктционалное показала да калемљени карактерише фибробласти активне синтезе ДНК, као и колаген, фибронектин и Гликозаминогликани, које настају у ћелијама екстрацелуларног матрикса. Аутори указују на висок проценат прихватања калема трансплантираних фибробласта (до 96%), нагло смањење смислу њихове припреме (у року од 2-3 сата уместо 24-48 недеља у случају кератиноцита), значајан убрзање епителизације опекотине површине, и значајно смањење у цени (ин 10 пута) технологије раста графта из фибробласта у поређењу са трансплатацијом кератиноцита. Употреба трансплантације у култури аллофибробластов омогућава да спасе животе деце са критичним Бурнс - термалне повреде преко 50% површине тела, који је претходно мислило неспојива са животом. Важно је напоменути да алогена трансплантација ембриона фибробласта и увјерљиво доказано не само бржу регенерацију рана и опоравак пацијената са различитим степена опекотина и подручја, али и значајно смањење морталитета.

Аутолого фибробласта се користе у таквом компликован и пластичну хирургију као оштећења замена корекције гласних жица. Обично се користи за ову сврху говеђим колагена, трајање акције која је ограничена његовом имуногеност. Бити страног протеина, говеђи колаген, колагеназе осетљива примаоцу и могу изазвати имуне реакције, да би се смањио ризик који технологију колагених препарата су развијени, умрежени са глутаралдехидом. Њихова предност је већа стабилност и нижи имуногеност, која је нашла практична примена у уклањању недостатака и гласних жица атрофије. Ињекције аутологног колагена прво су коришћене 1995. Године. Методе условом очување примарне структуре аутологих колагених влакана, укључујући ензимски катализоване унутармолекулских везивању. Чињеница да природна колагена влакна су отпорни на разградњу протеазама од реконституисаног колагених телопептидес назначен тиме цут. Интегритет телопептидес важно за кватернарне структури колагених влакана и умрежености између суседних молекула колагена. За разлику од припреме говеђег колагена, аутологне колаген не изазива имуни одговор код реципијента, али није довољно ефикасан као пуни агенс. Упорна корекција може се постићи захваљујући локалној производњи аутологне трансплантације колагена преко фибробласта. Међутим, истрага ефективности аутологне трансплантације фибробласта у клиници открио неке потешкоће. У раном периоду после трансплантације фибробласта клиничког ефекта био слабији у односу на то након примене говеђег колагена. Када култивисани аутологне фибробласта не може искључити могућност трансформације нормалних фибробласта у ненормално, тзв миофибробласти, одговорни за развој фиброзе и стварања ожиљака, што доказује смањење колагена гела, због специфичне интеракције фибробласта и колагених влакана. Надаље, након серијског пасажирањем су фибробласти ин витро губе способност за синтезу екстрацелуларног матрикса протеина.

Међутим, тренутно експериментална техника усавршио гајење људских аутологне фибробласта, који елиминише горње недостатке и доводи до онкогенеу трансформацију нормалних фибробласта. Аутологне фибробласте добијене овом методом користе се за попуњавање дефеката меких ткива лица. У студији Х. Келлер-а и коаутора (2000), 20 болесника старих од 37 до 61 година са боре и атрофичним ожиљцима примило је лијечење. Скин биопсије (4 мм) БТЕ регион смо транспортовани у лабораторију у стерилне епрувете које садрже 10 мл медијума за културу (Дулбеццо антибиотика микосептиком, пируват и феталног говеђег серума). Материјал је постављен унутар 3-5 посуда за културу пречника 60 мм и инкубиран у термостату са атмосфером која садржи 5% ЦО2. Након 1 недеље, ћелије су уклоњене из посуђа помоћу трипсинизације и стављене у бочице од 25 цм2. Ћелије се дају пацијентима у количини од 4 к 107. Значајан и дуготрајан клинички ефекат није примећен код пацијената са корекцију назолабијалну прегиба, а код болесника са ожиљцима после 7 и 12 месеци након трећег аутологне трансплантације фибробласта. Према токовној цитометрији, култивисане фибробласти су произвеле велику количину колагена типа И. Ин витро студије показују нормалну контрактибилност ињекционих фибробласта. Два месеца након субкутане примене култивисаних фибробласта у дози од 4 к 107 ћелија, нуде мишеви нису откривени. Фибробласти са ињекцијом нису узроковали настанак ожиљка и дифузну фиброзу код пацијената. Према аутору, имплантирани аутологни фибробласти су у стању да константно производе колаген, који ће дати ефекат козметичког подмлађивања. У овом случају, пошто је животни век диференцираних ћелија ограничен, фибробласти узети од младог пацијента су ефикаснији од оних добијених код старијих особа. У будућности се претпоставља да је могућност криопорезервације културе фибробласта узетих од младог донора да касније трансплантира на старије пацијенте своје сопствене младе ћелије. У закључку, није сасвим тачно закључак да аутологне фибробласта, уколико њихов функционални сигурност су идеални за корекцију лица дефеката меких ткива. Истовремено, сам аутор напомиње да су у процесу истраживања настале и неке проблематичне ситуације повезане са употребом аутологног фибробласт-колагена система. Клинички ефекат је често био слабији него код употребе говеђег колагена, што је изазвало разочарање код пацијената.

Генерално, подаци о литератури о перспективама клиничког коришћења мезенхимских матичних ћелија изгледају сасвим оптимистични. Покушају се употреба аутологних мултипотентних мезенхималних прогениторских ћелија за лечење дегенеративних зглобних лезија. Прво клиничко испитивање култивисаних месенцхимал прогениторских ћелија у лечењу комплексних прелома кости. Аутологна анд алогене месенхималне строме коштане сржи ћелије које се користе за генерисање хрскавице ткиво за трансплантацију у корекцију недостатака зглобне хрскавице услед трауме или аутоимуним лезијама. Практицирали методе клиничке примене мултипотентне мезенхималне родитељских ћелија за исправљање недостатака у костима код деце са тешким остеогенезис напретком проузрокована мутацијама типа И колагена гена. Након миелоабелиатсии дјеци прималаца трансплантације коштане сржи од ХЛА-компатибилним здравог даваоца као нефракционисаног коштане сржи може да садржи довољну количину месенхималне матичних ћелија за растурање тешке коштани дефект. Након трансплантације, алогена коштане сржи таква деца означена позитивне хистолошке промене у трабекуларне кости, повећање стопе раста и смањења инциденце фрактуре костију. У неким случајевима, позитиван клинички резултат постиже се трансплантирањем блиско повезане алогене коштане сржи и остеобласта. За лечење урођених кости крхкост због неравнотеже остеобласта и остеокласта у коштаном ткиву, а половну МСЦ трансплантације. Обнова формирања костију у овом случају постигнута је због химеризације базена стромалних ћелија стенских и прогениторских ћелија у коштаном ткиву пацијената.

Методе генетске модификације донорских мезенхимских матичних ћелија се побољшавају како би се кориговали генетски дефекти стромалних ткива. Претпоставља се да ће мезенхијалног прогениторне ћелије ускоро се користи у неурологији за правца цхимеризатион можданих ћелија и створи фонд од здравих ћелија, које могу да генеришу непотпуну ензим или фактор који је одговоран за клиничких манифестација болести. Трансплантација мезенхималних матичних ћелија могу користити за враћање коштане сржи строму код пацијената са карциномом након радиотерапије и хемотерапије, а у комбинацији са ћелија коштане сржи - за рестаурацију хематопоезе. Развој супституционе терапије у циљу елиминисања недостатке коштаног система користећи МСЦ промовисати инжењеринг у биоматеријала десигн матрице или биомимичари формирају костуре настањују потомство мезенхималним матичних ћелија.

Извори мезенхимских матичних ћелија

Главни извор месенхималне матичних ћелија је коштане сржи хематопоезе матичних ћелија која је у сисара константно издвајају у крвне ћелије и имуног система, док матичне ћелије месенхималне представили мале популације фибробласта налик коштане сржи стромалних ћелија и помажу одржавати једнолику стање хематопоетског матичних ћелија. Под одређеним условима, мезенхимске матичне ћелије се разликују у ћелијама крвотворног и коштаног ткива. Када се постављене на медијуму културе су са ниском густином садње мононуклеарних коштане сржи стромалних ћелија формирају колоније истрајни ћелија, које, у ствари, нису фибробласта мултипотентне мезенхималним прекурсор ћелије. Неки аутори су предложили да коштане сржи депонује необавезана мезенхималне матичне ћелије, које, захваљујући Способност самосталног-обнављање и високе диференцијације потенцијалне, обезбеди сва ткива тела претходника мезенхималне стромалних ћелија током живота организму сисара.

У коштаној сржи елементи стромалних ћелија формирају мрежу која испуњава простор између синусоида и коштаног ткива. Садржај мирисног МСЦ у коштаној сржи одрасле особе упоредив је са бројем хематопоетских матичних ћелија и не прелази 0,01-0,001%. Месенцхималне матичне ћелије које су изоловане из коштане сржи и које нису подвргнуте култивацији су лишене адхезивних молекула. Такви МСЦ не изражавају ЦД34, ИЦАМ, ВЦАМ, колаген типа И и ИИИ, ЦД44 и ЦД29. Дакле, ин витро матичне ћелије месенхималне нису причвршћене за подлогу културе, и напредније прогениторне изведене мезенхималне матичне ћелије, су формирали цитоскелетне компоненте и апарат ћелијске адхезије молекула рецептора. Стромалне ћелије са фенотипом ЦД34 налазе се чак иу периферној крви, иако су много мање у коштаној сржи од ЦД34-позитивних мононуклеарних ћелија. ЦД34 ћелије изоловане из крви и пренесене у културу, приписују супстрату и формирају колоније фибробластих ћелија.

Познато је да у ембрионалном периоду стромална база свих органа и ткива сисара и људи произлази из заједничког базена месенцхималних матичних ћелија пре и на стадијуму органогенезе. Стога се верује да у зрелом телу већина месенцхималних матичних ћелија треба да буде у везивном и коштаном ткиву. Утврђено је да већину ћелијских елемената строма лоосе везивног и коштаног ткива представљају посвећене прогениторске ћелије, које, међутим, задржавају способност пролиферације и формирања клона ин витро. Са увођењем таквих ћелија у укупан проток крви, више од 20% месенцхималних прогениторских ћелија се имплантирају међу стромалне елементе хематопоетског ткива и паренхимских органа.

Потенцијални извор месенхималне матичних ћелија је масно ткиво, међу којима почињених матичних ћелија у различитом степену адипоцита предака. Најмање матуре прогениторне елементи масног ткива - стромалних-васкуларним ћелијама, што је исто као мултипотентне месенхималне праочеве костне сржи могу разликовати у адипоците под дејством глукокортикоида, инсулину сличан фактор раста и инсулина. У култури стромалних васкуларних ћелија диференцирају у адипоцита и хондроцитима и масног ткива коштане ћелије сржи изведен формирају масних ћелија и остеобласта.

У мишићима су такође пронађени извори стромалних стабљика. Примарне културе ћелије изоловане из хуманом скелетном мишићу, открива у облику звезде ћелије и мултинуцлеатед миотубес. У присуству коњског серума стелатним ћелија размножавају ин витро без знакова цитодифферентиатион и након додавања дексаметазона до медијум културе диференцијације карактерише појавом ћелијских елемената ћелија са фенотипом скелетних и глатке мускулатуре, костију, хрскавице и масног ткива. Сходно томе, у људској мишићном ткиву представљени као посвећених и неурезаним мултипотентне мезенхималним претходнике. Показано је да популација родитељских ћелија присутних у скелетним мишићима долази од неурезаним мултипотентне коштане сржи мезенхималне родитељских ћелија, а разликује се од миогениц сателитских ћелија.

У миокарда живорођене пацова такође пронађен лепљиве стелатним ћелије, одговарајуће за диференцијације потенцијал мултипотентне мезенхималне родитељских ћелија, као под утицајем дексаметазона праве разлику у адипоците, остеобласта, хондроцитима, глатке мишићне ћелије, миотубес скелетних мишића и срчане миоцитима. Показало се да су васкуларних глатких мишићних ћелија (перицити) изведени мултипотентне неиздиференциране периваскуларних мезенхимална прекурсорима ћелија. У култури периваскуларних месенхималне матичних ћелија експримира-глатких мишића актин и фактор раста крвних плочица рецептор и могу разликовати барем глатке мишићне ћелије.

Посебно место у погледу матичних резерви узима хрскавица, од којих Веома низак поправних потенцијал верује да је због недостатка мултипотентне мезенхималне родитељских ћелија или диференцијацију и раста фактора. Претпоставља се да прекоммитированние се хондро- и остеогенеза мултипотентне мезенхималне прогениторне ћелије улазе у хрскавице ткиво из других извора ткива.

Порекло ткива и услови за извршење месенцхималних прогениторских ћелија у тетивима такође нису утврђени. Експерменталние запажања сугеришу да почетком постнаталним раббит Ахилове тетиве ћелијама у примарним културама у првом пасусу и задржати експресију колагена типа И и децорин, али после додатне култивисања изгубе тенотситов маркера диференцијације.

Треба напоменути да је одговор на питање да ли заиста локализованог у различитим ткивима мултипотентне месенхималне родитељских ћелија су увек присутни у свом строма или ткива базен мезенхималних матичних ћелија надокнађује миграција строме коштане сржи матичних ћелија, још увек чека.

Такође Коштана срж и други мезенхималне зоне ткива одраслих други извор МСЦ може пупчане крви. Показало се да пупчане врпце венске крви садржи ћелије које имају сличне морфолошке и антигене особине са мултипотентне месенхималне родитељских ћелија у стању адхезије, а не инфериорни мултипотентне мезенхималне родитељских ћелија коштане сржи порекла диференцирањем потенцијал. У културама месенхималне матичним ћелијама крви пупчаника откривене од 5 до 10% неурезаним мултипотентне мезенхималним претходнике. Испоставило се да је њихов број у врпце је обрнуто пропорционална гестацијске старости, што је индиректан доказ миграција мултипотентне месенхималне родитељских ћелија у различите ткивима током феталног развоја. Било Први подаци о клиничкој примени месенхималне матичних ћелија изолованих из крви пупчане врпце, као ембрионалног изведени биоматеријала, која се заснива на познатом способности феталних матичних ћелија интегришу и функција призхивлиатсиа органима и системима ткива одраслих прималаца.

Тражење нових извора месенцхималних матичних ћелија

Употреба месенцхималних матичних ћелија ембрионалног порекла, као и друге феталне ћелије, ствара низ етичких, законских, правних и законодавних проблема. Због тога, трагање за ектраембрионичним ћелијским донаторским материјалом наставља се. Покушај није успео клиничка примена хуманих фибробласта коже, је одређена не само високим финансијским капацитетима технологије, али и брзу диференцијацију фиброцитес у фибробласта које имају знатно мањи потенцијал пролиферације и производе ограничен број фактора раста. Даљи напредак у области биологије и МСЦ су мултипотентне месенхималне коштане сржи родитељских ћелија дозвољено да развије стратегију за клиничку употребу аутологих мезенхималним матичних ћелија. Технологија њихове изолације, култивације, ек виво репродукције и усмјерене диференцијације захтијева, пре свега, проучавање молекуларног маркерског спектра МСЦ. Њихова анализа показала је да у примарним културама људског коштаног ткива постоје неколико типова мултипотентних мезенхималних прогениторских ћелија. Проостеобластов фенотип налази у ћелијама које експримују родитељских ћелија маркер СТРО-1 стромалне али не носи маркер остеобласта - алкалне фосфатазе. Такве ћелије карактерише ниска способност формирања минерализоване костне матрице, као и одсуство експресије остеопонтина и рецептора паратироидног хормона. Деривати СТРО-1-позитивних ћелија који не изражавају алкалну фосфатазу представљају интермедијарни и потпуно диференцирани остеобласти. Утврђено је да су ћелијски елементи клонираних линија СТРО-1 позитивних ћелија људског трабекуларне кости су способни да диференцира у зреле остеоцитес и масних ћелија. Правац диференцијација ових ћелија зависи од изложености полинезасићених масних киселина, проинфламаторних цитокина - ИЛ-1б и фактор туморске некрозе а (ТНФ-а), као анти-инфламаторног и имуносупресивне ТГФ-б.

Касније је утврђено да мултипотентне месенхималне прекурсор ћелије немају специфичне само њима својствен фенотип, али изражавају комплексне маркери, карактеристичне за месенхималне, ендотелијалне, епитела и мишићним ћелијама у одсуству експресије хематопоетска ћелија иммунопхенотипиц антигена - ЦД45, ЦД34 и ЦД14. Поред тога, мезенхималне матичне ћелије и конститутивно индуцибли производе хематопоезе и нон-хематопоетске факторе раста, интерлеукина, и хемокина, иу мултипотентне месенхималне прекурсора ћелија изражених рецепторе за неке факторе раста и цитокина. Међу стромалних ћелија основе људског тела пронађен дормантние или одмарају ћелија са иммунопхенотипе, готово идентична антигеном профилу сирових 5-флуороурацила мултипотентне мезенхималне родитељских ћелија - оне и друге ћелије изражавају ЦД117, означавање "за одрасле" матичне ћелије.

Стога, ћелијски маркер јединствен за мезенхималне матичне ћелије још увек није утврђен. Претпоставља се да одмарају ћелије неизврсених популације мултипотентне месенхималне прекурсора ћелија јер не изражавају ћелија маркера посвећена остеоартритиса (ЦБФА-1) или адипогенези (ППАР-и-2). Продужено излагање полно пролиферирајућих ћелија за одмрзавање до феталног телечјега серума доводи до формирања терминално диференцираних прекурсора, које карактерише брз раст. Клонални раст таквих стенских мезенхималних ћелија подржава ФГФ2. Изгледа да геном-изведене стромалних матичне ћелије "затворено" тигхт Довољно је пријављено због одсуства спонтаног диференцијације у МСЦ -. Без посебних услова за чињење и они се не конвертују у ћелије мезенхимског серије.

Да би се испитао структуру становништва изведено мезенхимална матичне ћелије се претражују маркер диференцијација протеине на ћелијским линијама стромалних и примарним културама. У клонских цолони теста коштане сржи ћелије ин витро утврдио да када се подвргне примарним културама ЕГФ повећава просечну величину колонија и смањује клонска експресију алкалне фосфатазе, а додавање хидрокортизон активира експресију алкалне фосфатазе која је маркер остеогеним диференцијације МСЦ оријентације. Моноклонска антитела против Стро-1 омогућио да се раздвоје и студија популација СТРО-1 позитивних истрајни ћелија у хетерогеном систему Дектер култура. Спектар цитокина регулише не само пролиферацију и диференцијацију хематопоетских и лимфних ћелија, већ учествује у формирању, формирања и ресорпције скелетног ткива од пара, ауто- и ендокриним механизмима. Рецептор-посредоване ослобађање секундарних гласника попут цАМП, диацилглицерол, инозитол-трифосфата и Ца2 + се такође користе за маркер анализу различитих категорија стромалних ткива ћелија које експримују релевантне рецепторе. Употреба моноклонских антитела као маркери дозвољено да успоставе строме лимфоидних органа припадају ретикуларно ћелије за Т и Б-зависних зонама.

Неко време научни спорови наставили су се око питања могућности порекла МСЦ из хематопоетске матичне ћелије. Заиста, уз објашњење суспензије ћелија коштане сржи у монолојне културе, у њима расте дискретне колоније фибробласта. Међутим, показало се да присуство прекурсора фибробласта колонија и разних бактерија диференцијације хематопоезе ткиву као део коштане сржи није доказ њиховог заједничког порекла хематопоетских матичних ћелија. Користећи дискриминативне анализа костне сржи матичних ћелија утврдила да микрооколини у хетеротопичној трансплантације, хематопоетске ћелије коштане сржи се преноси, што доказује постојање, у коштаној сржи независно од хистогенетиц МСЦ популације хематопоетских ћелија.

Поред тога, селективни поступак клонирање откривена у једнослојне културама костне сржи стромалним ћелијама нову категорију прекурсора ћелија да одреде њихов број, да проучи своја имања, пролиферативне и диференцијације потенцијал. Утврђено је да ин витро фибробласта-лике строме ћелије се множе и формирају диплоидна колоније када обрнути трансплантацију у тело обезбеђује формирање нових органа ствара крв. Резултати студија појединих клонова указују да постоји популација ћелија у њиховој пролиферативних и диференцијације потенцијал способних захтеву улогу матичних ћелија строме ткива, Гистогенетицхескаја независно хематопоетских матичних ћелија у строме родитељских ћелија. Ћелије ове популације карактеришу самоносиви раст и разликују се у прогениторске ћелије ткива коштане, хрскавице и ретикуларне коштане сржи.

Великог интересовања су резултати студија Цхаилакхиан Р. Ет ал (1997-2001), који су култивисане коштане сржи-изведени стромалних родитељских ћелија зечеве, заморце, а мишеви а-МЕМ медијуму за културу допуњеној са феталним говеђим серумом. Аутори су извршили експлантацију са почетном густином од 2-4 к 103 ћелија коштане сржи по 1 цм2. Како се користи довођење хомоиог или хетерологни дезактивира озрачивања коштане сржи у дози напојној линији потпорног акције, али потпуно блокирани пролиферације. Двонедељне примарне дискретне колоније фибробласта су трипсинизоване за производњу моноклоналних сојева. Евиденце колоније клонова порекла добијени су коришћењем хромозомске маркера у мешовитим културама костне сржи мушког и женског заморци, тиме-лапсе снимање живих култура, као иу мешовитим културама костне сржи сингеним мишева и ЦБА СВАТ6Т6. Трансплантација Талог свеже изолованих коштане сржи узгајане ин витро или стромалним фибробласта испод бубрежне капсуле је спроведено у ивалонових порозне скела или желатин, као инактивирани зеца матрикса спонгиозну кост. Трансплантација клонови у кост поклопца бутине заморче очишћеног од меког ткива и периостеума, цут епифизе и темељно прали коштану срж. Кости су сечене у фрагменте (3-5 мм), осушене и зрачене у дози од 60 Ги. У кожним покривачима, поједине фибробластне колоније су постављене и имплантиране интрамускуларно. За интраперитонеалне трансплантацијом стромалних фибробласта, узгаја ин витро, користили смо типови дифузије комору А (В = 0,015 цм 3, Х = 0, л мм) и Д (В = 0,15 цм 3, х = 2 мм).

Када се проучавају динамику раста клонова сојева Цхаилакхиан Р. Ет ал (2001) установио да појединачне ћелије, које формирају колоније фибробласти, као и њихови потомци имају велики пролиферативни потенцијал. До десетог броја, број фиброблава у неким сојевима био је 1,2-7,2 к 10 ⁹ ћелија. У процесу њиховог развоја, изводили су до 31-34 ћелијске дупликације. Тако хетеротопичној Трансплантација коштаних сојева сржи изведен формираних стромалних прекурсора неколико десетина клонова довеле до преноса коштане сржи микрооколине и образовања у новој трансплантације зони хематопоезе органа. Аутори покренуо питање да ли поједини клонови могу толерисати коштане сржи микрооколине Стромал ћелије, или захтева сарадњу неколико различитих цлоногениц строме претка? А ако појединачни клонови ће бити у стању да пренесе микро околину, да ли је пуна сва три клице крви, или различити клонови обезбеди формирање хематопоезе микрооколине за различите бацила? За решавање ових проблема је развијао технологију гајења стромалних стем ћелија у колаген гел који омогућава снимање са површине фибробласта гајених колонија за каснију хетеротопичној трансплантацију. Појединачни клонови строме фибробласта, коштане сржи, које су расле са ЦБА мишеви и заморци, сечене заједно са фрагментом гела капут и пресађене хетеротопичној - под капсулу бубрега сингеним мишева или аутологне мишића стомака заморце. Када је трансплантација у мишић, колоније на гелу постављене су у коштане поклопце.

Открили смо да за 50-90 дана након трансплантације коштане сржи фибробласта колоније у 20% случајева су посматрани у развоју трансплантације зони кости или костију и хематопоезе ткиву. У 5% прималаца животиња формиран џепове костију које имају шупљину испуњену коштане сржи. Унутар костију цилиндара таква фоци има заобљен облик и капсулу направљену коштаног ткива, са остеоцитес и добро развијену остеобласним слој. Коштана срж шупљина садржи ретикуларно тканина која мијелоидне и еритроидних ћелија, пропорције које не разликују од оних у нормалном коштаној сржи. Графт бубрег типичан мождински тело формирано од нативном трансплантације коштане сржи, где кост капсула покрива само медуларну шупљину са бубрежним омотачем. Ткиво капуљача укључивало је мијелоидне, еритроидне и мегакариоцитне елементе. Строма од медуларног канала је синуси добро развијени и садржи типичан систем масти ћелија. Истовремено у области трансплантације неког колонија кости без знакова хематопоезе је пронађен испод капсуле бубрега. Студија пролиферативног и диференцијацију потенције индивидуалних клонова су наставили моноклоналних сојевима зец коштане сржи, ћелије су ресуспендоване у медијуму културе иу посебном ивалоновои сунђер тежине 1-2 мг ушушкан испод капсуле бубрега у сржи донатора зец костију. Оваква аутотрансплантација је подвргнута ћелијама 21 моноклоналног соја. Резултати су узети у обзир за 2-3 месеца. Пронађена аутори који 14% трансплантираних коштане сржи моноклоналних сојева формирано тело састављено од костију и коштане сржи шупљину напуњен хематопоетским ћелијама. У 33% случајева пресађене сојеви формирала компактна кост разним шупљинама величина остоотситами зазидао остеобласним и развијено слоја. У неким случајевима, сунђери пресађене клонови развијен ретикулум без кости или хематопоетских ћелија. Понекад ретикуларне формирање строме дошло са добро развијеном мрежом синусоида, али није попуњен у хематопоетске ћелије. Тако добијени резултати су слични онима добијеним трансплантације клонова на колагена гелу. Међутим, ако је трансплантација клонова нарасла на подлогу резултирао формирању сржи ткива је 5% од кости - 15% а ретикуларне тканина - у 80% случајева, трансплантација моноклонално сојеви формирање ћелија коштане сржи је примећено у 14% случајева кости - у 53% и ретикуларно - у 53% случајева. Према ауторима, то значи да су услови за спровођење пролиферативних и диференцијације потенцијала стромалних фибробласта када трансплантираних на порозне структуре које су оптималније него својим трансплантацијом у кости и покрива колагена супстрат. Није искључено да употреба напреднијих метода гајења и трансплантације клонова повратне могу да побољшају услове за реализацију њених клонова диференцијације потенцијала и промените ове односе. Један или други начин, али главна вредност истраживања лежи у чињеници да неки од клонова строме ћелије способне да формирају коштано ткиво истовремено осигуравајући строме хематопоезе микроокружења одмах за три клице коштане сржи крви: еритроидна, мијелоидне и мегакариоцита, стварајући довољно велика упоришта хематопоезе ткива и нека кост маса.

Даље, аутори бавила питањем капацитета за ове врсте ћелијске диференцијације појединих цлоногениц строме стем ћелија у затвореном систему дифузије комора. Такође, било је потребно да се утврди да ли појединачни клонови плурипотентне предмет или дисплеј за разликовање потенцијал захтева кооперативног интеракцију неколико клонова са фиксном знак цитодифферентиатион, различит однос који одређује преференцијални формирање костију, хрскавице или ретикуларно. Комбиновањем два методолошка приступа - моноцлонал изолати Коштана срж стромалне родитељских ћелија и пресадити их у коморе дифузије, Цхаилакхиан Р. Ет ал (2001) добијених резултата које дозвољавају да се приближи разумевање структурног организације строме коштане сржи. Трансплантације моноклонална сојеви строме родитељских ћелија инто О ћелија типа резултирала у формирању и за кости и хрскавице, показује способност потомака једног које формирају колоније стромалних ћелија истовремено формирају кост и хрскавицу. Претпоставка да кост и хрскавичасто ткиво потичу из уобичајене стромалне прогениторне ћелије више пута се више изражава. Међутим, ова хипотеза није имала тачну експерименталну потврду. Кост и формирање хрскавице у дифузионе коморама било неопходно доказати постојање матичних ћелија укључују костне сржи строме прекурсорима ћелија заједничка за ове двије врсте ткива.

Затим 29 клонова истегнућа друга и трећа пасажи, примарним културама изведени из коштане сржи зеца су постављени у дифузионе коморе и имплантиран интраперитонеално хомологне животињу. Студије су показале да 45% моноклоналних сојева коштане сржи имају остеогене потенције. Изузетно ретикуларне фабриц садржао коморе 9, али са костима и хрскавице је и даље присутан у коморама 13, што представља 76% свих сојева. У коморама типа О, где је могућа диференцијација за кост и хрскавичасто ткиво, испитивано је 16 сојева. У четири коморе (25%) формирано је и костно и хрскавично ткиво. Поново треба истаћи да студије Цхаилакхиан Р. Ет ал (2001) појединачне родитељских ћелија подвргнути ћелије сој се састоји од од 31 до 34 дуплирања, а њихова потомство је 0.9-2.0 × 10 ⁹ ћелија. Број митоза на које су изложене ћелије предходника поликлоналних сојева биле су практично исте као и код ћелија моноклоналних сојева. Истовремено, стопа развоја поликлоналних сојева, нарочито у првој фази њиховог формирања, значајно је зависила од броја колонија које су коришћене за иницијацију синдрома. Диплоидна сојеви хуманих ембриона фибробласта (ВИ-38) за 12-15 реклонировании тх удвостручавања нивоима такође формиран колонија различите пречник иу њиховом садржају ћелија. Велике колоније које садрже више од 103 ћелије биле су само 5-10%. Повећањем броја подела смањен је проценат великих колонија. Моно- и поликлонална сојеви коштане сржи строме фибробласта задржала диплоидна хромозом сет након 20 или више дуплирања и тенденција развоја био је упоредити са динамиком диплоидних сојева ембриониц фибробласта. Анализа диференцијацију потенцијала појединих коштане сржи строме родитељских ћелија, које је спровео сојевима трансплантације моноклонска ин дифузије коморама, показало да половина њих остеогенични. Велике колоније чиниле су 10% њиховог укупног броја. Сходно томе, број остеогених ћелија за формирање колонија одговара приближно 5% укупне популације. У укупној маси остеогених прогениторских ћелија које су идентификовали аутори, биле су истовремено ћелије способне за формирање кости и хрскавог ткива. По први пут је утврдио да за ове две врсте ткива у организму одраслих је заједничко прекурсор ћелије: 25% тестираних клонова су створени слични ћелијама, а њихов број у општој популацији родитељских ћелија није мање од 2,5%.

Тако је хетеротопска трансплантација појединих клонова фибробласта костне сржи отворила нове аспекте структурне организације становништва месенцхимал прогениторских ћелија. Фоунд стромалног родитељских ћелија способне преношења специфичног микро околину одмах за сав хемопоиетиц стабљике који број између испитиваних клонова већих на другим моделима је од 5 до 15% (0,5-1,5% од укупног броја родитељских ћелија откривеног). Уз клонова, преношење комплетно коштане сржи микроокружења постоје родитељских ћелија, детерминистички само на стварање костију, што облику када преноси на отвореном систему, кости који не подржава развој хематопоезе. Њихов број од укупног броја прогениторских ћелија је 1,5-3%. Неке од ових ћелија могу формирати коштано ткиво са ограниченим периодом самоодржавања. Сходно томе, популација стромалних ћелија прогенита је хетерогена у свом потенцијалу диференцирања. Међу њима постоји категорија ћелија, тврдећи улогу строме матичних ћелија способних да диференцира у све три димензије инхерентних коштане сржи строме ткива, формирање кости, хрскавицу и ретикуларно ткиво. Ови подаци омогућавају нам да се надамо да уз помоћ различитих ћелијских маркера ће бити могуће одредити допринос сваког типа стромалних ћелија у микро специфичне организације и подрже хематопоезе у Дектер културама.

Карактеристике мезенхималних матичних ћелија

Током последњих година је закључио да у стационарним културама костне сржи мезенхимског мултипотентне родитељских ћелија представио ограничену популацију малих агранулар ћелија (РС-1) ћелијама, које карактерише ниска способност колонизације и одсуства Ки-67 антиген експресије специфичне за ћелијама које се размножавају. Антигени параметри дормантних РС-1 ћелије се разликују од спектра почињених антигена брзо пролиферацијом строме родитељских ћелија. Утврђено је да је висок степен пролиферације посвећених прогениторских ћелија забележен само у присуству ћелија РС-1. Заузврат, РС-1 ћелија повећава стопу раста под утицајем фактора луче највише зрелих изведени мултипотентне мезенхималним родитељских ћелија. Изгледа да су ћелије РС-1 подкласе независних МСЦ које су способне за рециклирање. Ин витро отпоран на 5-флуороурацил стромалних родитељских ћелија коштане сржи карактерише ниским садржајем РНК и високим нивоима експресије орнитин декарбоксилаза гена - маркера не ћелијама које се размножавају.

Интензивна репродукција стромалних прогениторних ћелија почиње након фиксације на супстрату. Када је то изражено маркер менаџера слабо диференцираних ћелија: СХ2 (ТГФ рецептор (3), СХ3 (домена сигнализирање протеин), врсте колагена И и ИИИ, фибронектин, адхезије рецептор ВЦАМ-1 (ЦД106) и ИЦАМ (ЦД54), кадхерин-11 , ЦД44, ЦД71 (трансферински рецептор), ЦД90, ЦД120а и ЦД124, али без израз карактеристичних маркера хематопоезних матичних ћелија (ЦД34, ЦД14, ЦД45). Клонска раста омогућава узастопно додаване мезенхимална матичне ћелије да производе културе многих генетски хомогене стромални матичних плурипотентне ћелије. 2-3 пролаз њиховог броја достиже 50-300 милиона. У култури довољном густином након заустављања пролиферацију стромалног родитељских ћелија, за разлику хематопоетске фибробласти ткива диференцирају у адипоците, миоцитима, ћелије хрскавице и коштаног ткива. Комбинација регулаторних сигнала тхрее диференцијације садржи 1-метил-изобутилксантин (индуктор интрацелуларног цАМП формирања), дексаметазон (инхибитор фосфолипазе a и Ц) и индометацин (инхибитор циклооксигеназе, тромбоксана снижавања активности и) преда адипоцити до 95% прогениторских мезенхималних ћелија. Форматион адипоцитног из незрелих стромалних ћелија потврдио експресију липопротеин липазе гена, хистохемијског идентификација аполипопротеина и перокисомал рецептора. Ћелије истог клона утицале ТГФ-б у медијуму без серума ствара хомогену популацију хондроцита. Целл цултуре вишеслојног хрскавице екстрацелуларног матрикса карактерише развијен састоји од протеогликана и колагена типа ИИ. Хранљиве подлоге са 10% феталног серума ефекат диференцијације сигнала комплекса који се састоји од б-глицерофосфат (донатор неорганског фосфата), аскорбинска киселина и дексаметазона, у истим култури стромалних прогениторних родитељских ћелија доводи до формирања агрегата ћелија. У таквим ћелијама, постоји прогресивно повећање активности алкалне фосфатазе и Остеопонтин нивоу, указујући формирање коштане минерализације које ћелије потврдио прогресивно повећање интрацелуларног калцијума.

Према неким, способност месенхималне матичних ћелија бесконачно дели и репродукција разних врста месенхималне лозе ћелија у комбинацији са високим степеном пластичности. Када се ординирају у коморама или белој маси месенхималне матичних ћелија мигрирају у паренхима нервног ткива и диференцирају у неуронског или глијалног изведене ћелијске линије. Поред тога, постоје подаци о МСЦ трансдифферентиатион у хематопоетским матичних ћелија ин витро, и ин виво. Детаљнија анализа у неким студијама одређеним изузетно Висока растегљивост од МСЦ, која се манифестује у њиховој способности да диференцирају у астроцитима олигодендроцита, неурона, кардиомиоцитима, ћелије глатких мишића и скелетних мишића ћелије. Ин а број студија трансдифферентсировоцхного потенцијал МСЦ ин витро и ин виво установио да мултипотентне мезенхималне прекурсор ћелије коштане сржи порекла терминално диференцирају у ћелијским линијама које формирају кост, хрскавица, мишића, живаца и масно ткиво, као тетива и строме која подржава хематопоезе .

Међутим, у другим студијама, без знакова ограничења плурипотенцију геном месенхималне матичних ћелија и не може се открити строме предак ћелијске популације, али провери евентуалне плурипотентне стромалних ћелија је испитивана преко 200 МСЦ клонова изоловане од примарне културе. Огромна већина ин витро клонова задржао способност да диференцирају у остеогених, цхондрогениц и адипогениц правцима. Када искључујући вероватноћу миграције ћелија примаоцу трансплантације месенхималне матичних ћелија под капсулу бубрега или у дифузионе коморама изгледало да строме родитељских ћелија ин ситу задржавају хетерогену фенотип, што указује или одсуство зоне трансплантације рестрикционих фактора или одсуство само плурипотентних МСЦ. У исто време дозволио постојање ретка врста соматских плурипотентних матичних ћелија, које су заједничке претече одраслих матичних ћелија.

Он мулти-, али не истинито плурипотентне мезенхималне матичне ћелије представљају врло мали део коштане сржи и способне су да у одређеним околностима, када се гаје ин витро пролиферацију без долажења у диференцијације, о чему сведочи њихов индукованог род посвећености ћелија у коштаној, хрскавице, масног, мишићног ткива , као и код теноцита и стромалних елемената који подржавају хематопоезу. Типично, континуирано излагање у медијуму културе са феталним говеђим серумом изазива излазне МСЦ у строме извршених родитељских ћелија, потомци који подлеже спонтану коначни диференцијацију. Ин витро могуће остварити усмерено формирање остеобласт додавањем у медијум уређај дексаметазон, ß-глицерофосфат и аскорбинска киселина, а комбинација диференцијације сигнала дексаметазон и инсулин индукује формирање масних ћелија.

Утврдио да пре уласка у фазу терминалног диференцијације коштане сржи МСЦ створити одређене услове култури најпре диференцирају у фибробласта налик мезенхималним матичних ћелија. Деривати ових ћелија ин виво су укључени у формирање кости, хрскавице, тетиве, мастима и мишићно ткиво као строме подршке хематопоезе. Многи аутори разумеју термин "мултипотентне мезенхимална родитељских ћелија" као заправо МСЦ, а посвећени строме родитељских ћелија и коштане сржи мезенхимална ткива. Клонска анализа месенхималне мултипотентне стем ћелије коштане сржи порекла показало је да нешто више од једне трећине од клонова диференцираних у остео-, хондро- и адипоците, док су остали клонова ћелија имају остеогенични потенцијал и образац само хондро- и остеоцитес. Ова клон мултипотентне месенхималне прекурсора ћелија као ИУД-9, под одговарајућим условима микрооколине диференцирају у ћелије са фенотипом и функционалних карактеристика не само остеобласта, хондроцитима и АДИЦ потситов али стромалних ћелија који подржавају хематопоезе. Изоловане из феталних сржи пацова коштане клонирати РЦЈ3.1 диференцирана месенхималне ћелије различитих фенотипа. До комбинованим деловањем аскорбинске киселине, б-глицерофосфат, и дексаметазон из ћелијских елемената овог клона се формира први мултинуцлеатед миоцитима а затим сукцесивно, адипоцити, хондроцити и острвца минерализације костију. Популација зрнастих ћелија из периостеума пацова фетуса одговара неурезаним мултипотентне месенхималне родитељских ћелија, што је окарактерисано ниском стопом пролиферације, не изражава маркери диференцијације, и диференцирано у условима културе за формирање хондро-, остео- и адипоцита и глатке мишићне ћелије.

Стога, треба признати да је питање плиури- или мултипотенци геном месенхималне матичних ћелија је и даље отворен, што последично утиче на презентацију диференцијације потенцијала стромалних стем ћелија, која такође није у потпуности инсталирана.

Експериментално доказана и важна карактеристика месенхималне матичних ћелија је њихова способност да напусте нишу ткива и циркулише у општем оптицају. Да би се активирао генетички програм диференцијације, такве циркулационе матичне ћелије треба да падну у одговарајућу микро окружење. Показано је да када се примени системски у крвоток МСЦ примаоца животиња незрелих ћелија имплантиране у различитим органима и ткивима, а онда диференцирани у крвне ћелије, миоцитима, адипоците, хондроцитима и фибробласта. Сходно томе, у локалним срединама ткивно јавља Сигнал-регулаторни интеракцију посвећених и неурезаним стромалног родитељских ћелија, као и између њих и околних зрелих ћелија. Претпоставља се да се диференцијација индукција се врши паракриних регулаторне факторе мезенхималног порекла и немезенхималного (факторе раста, еикосаноида, екстрацелуларне матрице молекуле) који обезбеђују просторне и временске односе у микроокружењу мултипотентиал мезенхималним прогенитора. Стога локална оштећења мезенхијалног ткива треба да доведе до формирања микроокружења зона мултипотентне месенхималне прекурсор ћелије разликују квалитативно од комплексних регулаторних сигнала нетакнути ткива у којима физиолошки процеси настају уместо репаративног регенерације. Ова разлика је изузетно важна у погледу специјализације фенотипске ћелије у нормалној и оштећеном микроокољу.

Према идејама, овде се постављају механизми фундаменталне разлике два позната процеса - физиолошка регенерација и запаљенска пролиферација. Први се завршава обнављањем специјализованог састава ћелијског ткива и његове функције, док је резултат процеса пролиферације формирање зрелих елемената везивног ткива и губитка функције оштећене ткивне зоне. Тако, да развије оптимална апликационим програмима мултипотентне мезенхимална родитељских ћелија у регенеративне медицине и пластичне захтева пажљиво изучавање специфичности фактора утицаја микрооколине о диференцијације МСЦ.

Зависност структуре одељак матичних ћелија из пара- ћелије и аутокриних регулатора чија експресија је модулисан спољним сигналима, нема никог изван сумње. Међу најважнијим функцијама регулаторних фактора су контролне МСЦ асиметрични подела и експресија гена који одређују корак линеаге посвећеност и број деоба ћелија. Вањски сигнали, на којима зависи даље развој МСЦ-а, обезбјеђују их микро околина. Незрелим МСЦ пролиферацију довољно дуго, одржавајући способност диференцира у адипоците линије миофибробласти, хематогени строме ткива, ћелије хрскавице и кости. Установљено је да ограничено популација циркулишућих СБ34-негативне елементе стромалних ћелија из опште циркулације се враћа коштане сржи строме ткива, се трансформише у линију где ЦД34-позитивне хематопоезе стем ћелија. Ова запажања сугеришу да рециркулација прогениторне месенхималне ћелије у крвоток ткива пружа подршку за равнотежу стромалних матичних ћелија у различитим органима мобилизацијом заједнички пул незрели коштане сржи стромалних ћелија. Диференцијација МСЦ у ћелије са више месенхималне фенотипа и њихово учешће у поправка или регенерацију кости, хрскавице, тетиве и масног ткива ин виво су показале моделима трансфера усвојиоца на експерименталним животињама. Према другим ауторима, далеки миграција МСЦ васкуларног кревета се комбинује са локалним расељења или короткодистантним мултипотентне мезенхималне прекурсорских ћелија у ткиву на поправку хрскавице, регенерацију мишића и других реакција редукције.

Локалне резерве стем строме темељи ткива играју извор улогу ћелија у физиолошким процесима регенерацију ткива и се попуњавају из удаљених транспортних МСЦ као потрошња стромалних ткиво матичних ресурса. Међутим, потребна хитне мобилизације ћелијске репаративног капацитета, као што су мултипла траума, у поправних процесима регенерације учествује МСЦ цео воз, а периферија крвотоком регрутовани мезенхимална прекурсорима ћелија коштане сржи.

Трансплантација мезенхималних матичних ћелија

Постоје одређене паралеле између процеса физиолошке регенерације ткива и њиховог формирања током периода интраутериног развоја. Ембриогенеза људи и сисара, формирање различитих типова специјализованих ћелија пореклом од ецто, мезо и ендодермал КЛИЦИН ЛИСТ базену али уз обавезно учешће мезенхима. Лоша ћелијска мрежа ембрионалног мезенхимског ткива обавља бројне регулаторне, метаболичке, скелетне и морфогенетске функције. Боокмарк провизорна тела се врши тек после кондензације мезенхима на рачун раста цлоногениц стем ћелија које стварају основну Морпхогенетиц сигнала органогенезе. Стромални изведени ембриона мезенхим створи костура провизорна тијела и чине основу будућности услед раста примарног васкуларног и лимфних судова енергопластицхеского осигура. Другим речима, стромални елементи микроциркулаторне јединице феталних органа појављују се пре формирања њихових структурно-функционалних јединица. Поред тога, активно миграција месенхималне ћелија током органогенезе пружа просторна оријентација развија органе због обележавања своје границе запремине Рестрицтион хомеотичних хок-тепов. На строме јавља скелет и монтажу структурних и функционалних јединица паренхимских органа која често садржи морпхогенетицалли и функционално веома различитих ћелија. Сходно томе, у ембриогенези мезенхима су примарна функција и имплементира генерисањем регулаторне сигнале активирање регионалне пролиферацију Прогенитор и диференцијацију епителних ћелија. Ембрионске мезенхима ћелије производе факторе раста као што ноге, ХГФ-б, ГРП, за које постоје одговарајући рецептори о паренхимских родитељских ћелија. Зрелих диференциране ткива строме ћелије мреже одраслих организама такође генерише сигнале за одржавање виталности и пролиферацију родитељских ћелија немезенхималного порекло. Међутим, спектар стромалне регулаторни сигнали у постнаталној онтогенезе отхер (СЦФ, ХГФ, ИЛ-6, ИЛ-1, ИЛ-8, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-14, ИЛ-15, ГМ-ЦСФ, флт-3, ЛИФ итд.) И има за циљ пружање физиолошке регенерације или поправке оштећених зона ткива. Осим тога, спектралне карактеристике стромалних регулаторних фактора у сваком врстом ткива, па чак иу истом органу су различите. Посебно, хематопоезе и лимпхопоиесис на умножавање и диференцијацију хематопоетских и имунокомпетентних ћелија јавља само у одређеним органима, у оквиру којих делује строме микроокружења обезбеђивање услова за сазревање хематопоетских и лимфних ћелија. То је до регулаторним факторима микрооколине зависи од способности хематопоетских и лимфних ћелија да насели тело да се размножавају и сазревају у своје микроструктурних нише.

Међу компоненте екстрацелуларног матрикса, који производе мултипотентне мезенхималне прекурсорима ћелија, треба напоменути фибронектин, ламинин, колаген и протеогликане, као ЦД44 (хијалуронан и остеопонтин рецептор) прима главни део у организацији међућелијским интеракције и формирање екстрацелуларног матрикса у костној сржи и кости . Доказано је да коштане сржи мезенхималне, мултипотентне ћелије створи редсхественники стромалног микроокружења, пружања индуктивних и регулаторне сигнале не само МСЦ, него и хематопоетске прекурсоре и немезенхималние коштане сржи матичне ћелије. Познато је да МСЦ укључене у хематопоезе мерен њихове способности да диференцирају у стромалних ћелија које подржавају хематопоезе, где је активно навођење МСК сигнал добијених директно из хематопоиетиц матичних ћелија. Зато је култура мрежних строме стем ћелија је основа за исхрану свих клонова хематопоетских ћелија.

У зрелој организму интензитета хемодијализу и лимпхопоиесис у стању динамичног равнотежи са "потрошње" зрелих крвних ћелија и ћелија имуног система на периферији. Пошто коштане сржи строме ћелија и лимфоидни органи ретко ажурира значајни преструктурирање стромалне структуре не појављује у њима. Доносе систем динамичког равнотеже је могуће уз помоћ механичког оштећења сваког органа Хемо или лимпхопоиесис, што доводи до исте врсте узастопних промена које утичу не само и не толико хематопоетских или лимфних ћелија, као стромалне структуре оштећени орган. У процесу репаративног регенерације првенствено формира строме оквира који онда репопулације хематопоезе или имуних ћелија. Овај дуго позната чињеница чини посттрауматског регенерације погодан модел за проучавање Стромал микро околину органа ствара крв. Конкретно, за испитивање репаративног регенерацију костне сржи се користи механичка празни медуларну шупљине дугих костију - киретажа, омогућавајући да брзо и ефикасно доносе хематопоезе ткиво из стања динамичког равнотеже. Проучавајући процес репаративног регенерације хематопоетских и строме коштане сржи компоненти после механичке пражњења медуларног шупљине тибије замораца открили да између индикатора регенерацију хематопоетских и стромалних ћелија (број хематопоетских ћелија, концентрација и количина строме родитељских ћелија) постоји директна корелација. Поред тога, установљено је да је повећање популације стромалних родитељских ћелија јавља и раније након киретаже, а сами стромалне фибробласти су фосфатазополозхителними, што је карактеристика остеогеним ткива. Такође је утврђено да су киретажа 3-5 дуге кости доводи до раста популације ћелија у коштаној сржи и не управљан кост и у слезини, који је замораца је само лимпхопоиетиц тело.

Морфолошке пицтуре репаративним процеси у коштаној сржи киуретированних прелома заморци генерално одговара литературним подацима добијеним у експериментима на животињама других врста, динамика промене које се дешавају након уклањања хематопоетског ткива је исти за све врсте и разлика тиче само параметре време . Морфолошки пхасе поступак обнављање хематопоезе у медуларни шупљини празни у сукцесивним процесима организовање формирање крвног тромба груба влакана кости, његову ресорпцију, из синусоида и ретикуларно формирања строме, што даље репопулације хематопоетске елемената. Број хематопоетских родитељских ћелија у коштаној сржи регенерација ткива процеса повећања паралелном повећање садржаја хематопоетских матичних ћелија.

Герасимов Иу ет ал (2001) су упоредили промене у броју хематопоетских ћелија и количину строме ћелијских прекурсора у појединим фазама процеса регенерације. Утврђено је да квантитативне промене у ћелијама костне сржи у коштаној киуретированнои утакмице динамику морфолошких карактеристика регенерације. Смањење током прва три дана садржаја ћелије у Затражите аутори приписују губитак хематопоетских ћелија услед неповољних ефеката микрооколини, која ствара ретикуларне ткиво расте у преосталом коштане сржи у епифизе ау другом да се формирају фокусе остеоид и васкуларне дамаге киретажи. 7-12 тх даи подизање иадеросодерзхасцхих ћелије поклапа са појавом појединачног жаришта у мијелоидне хематопоетским стромалних ћелија пролиферације зонама. Дана 20. Постоје знатне делови регенерисане коштане сржи и добро развијеним синуса, који је праћен значајним повећањем у укупном броју ћелија. Међутим, број хематопоетских елемената у овом периоду износи 68% контролног нивоа. Ово је конзистентно са раније објављеним подацима који показују да само 35-40 дана после операције број ствара крв ћелија после киретаже достигне стандарде.

У раном посттрауматском периоду, главни ћелијски извор за обнову хемопоезе је целуларни елементи који се чувају у киретази. У каснијим терминима, главни извор регенерације хематопоетског ткива коштане сржи су матичне ћелије, репопулишу слободне стромалне зоне. Што се тиче одређених категорија стромалних ћелија (ендотелни, ретикуларни и остеогени), извори који обезбеђују њихово формирање током реконструкције међуларне шупљине остају необјашњиви. Резултати Иу.В. Герасимов и коаутори (2001) сведоче да је у коштаној сржи која је очувана након киретаже концентрација ћелија која чини фибробластне колоније значајно виша него у нормалној коштаној сржи. Аутори верују да киретажи интензивнији селективно елуирање хематопоетским ћелијама у поређењу са строме које формирају колоније ћелија које су укључени у формирању строме и чврсто повезане са основном супстанцом него хематопоетским ћелијама.

Динамика промена у броју ћелија формирају колонија фибробласта корелацији са интензитетом остеогенезе процеса накнадно трабецулар ресорпција кости и формирање ретикуларне строме која популације хематопоетске ћелије. Већина стромалних прогениторних ћелија формира грубопластно коштано ткиво и ретикуларну строму у наведеним временима регенерације. За прелома бутне кости у условима продужене Остеосинтеза на 5. Дана у регенерације зони повећава концентрацију ћелија и број колонија формирања фибробласта и формирање костију код интензивно њихов број се повећао за 6 пута. Познато је да ћелије коштане сржи која чине фибробластне колоније поседују остеогене особине. Број стромалних прогениторних ћелија повећава се пре колонизације подручја кортексоване коштане сржи помоћу хематопоетских ћелија. Ово се у доброј сагласности са доказима да стромалне ћелије обезбеђују настанак хематопоетског микрооквата. Очигледно, стварање хематопоетског микрооколине одговара одређени ниво регенерације строме ткива, а повећава број хематопоетских ћелија након експанзије строме Бридгехеад погодан за хематопоезе.

Од највеће интересовање су аутори података који одмах након киретаже повећава број ћелијских прекурсора стромалних у удаљеним деловима скелета. Полазећи од шестог часа, а до двадесетог дана закључно са супротне тибиа примећен у више од два-струког пораста у концентрацијама и броја ћелија које формирају колоније фибробласта. Механизам овог феномена је вероватно повезано са чињеницом да је масивна повреда коштане сржи доводи до формирања великог броја крвних угрушака истовремено уништава велики број тромбоцита и увођење у крви крвних плочица фактора раста (РБСК), који је познат да изазива пролиферацију ћелија формирају колоније фибробласти смештени у телу изван пролиферативног базена. У експериментима на зечевима локална администрација МСЦ промовише обнову хируршки оштећене хрскавице колена, која може бити повезан са формирањем хондроцита изведених из МСЦ уведене. Међутим поправних регенерација коштаних дефеката у лабораторијским пацова је значајно унапређена када се користе мезенхимална матичних ћелија затворени у керамичком раму. Стога можемо претпоставити да ако не РБОК, онда било који други фактор, изведене из оштећених стромалних ћелија има удаљену стимулативно дејство на пролиферацију месенхималне родитељских ћелија у нетакнутим областима коштаној сржи и стимулише њихову миграцију у подручје сржи ткива дефект костију. Заузврат, ово у супротности са подацима из литературе из претходних година, што значи да строме ћелије су одговорни за микро околини, за разлику од хематопоетским ћелијама нису у стању да мигрирају и долази из домаћих извора.

Ипак, резултати студије Герасимов Иу ет ал (2001) сугеришу да примена механичке трауме изазива не само оштар реструктурирање строме ткива у киуретированнои костију, али и значајних промена у строме удаљеним кости нетакнуте, односно, постоји системски одговор стромално ткиво за локалну трауму. А када се нанесе Политраума - Мултипле киретажу - ова реакција је појачан и посматра не само у управља костима и удаљеним деловима скелета, већ иу лимфним органима, посебно слезине. Механизам таквог одзива система на строме ткива коштаној сржи и слезини и локалне трауме Политраума остаје непозната. Претпоставља се да је овај процес повезан са деловањем хуморалног фактора објављеном мезенхималне строма мождински коштане сржи шупљина. Могућност израде коштане сржи стромалних ћелија и слезину органонеспетсифицхеского хуморални фактор одговоран за ћелијску пролиферацију, које формирају колоније фибробласти показују податке о њиховим стимулације колоније активност у једнослојне културама костне сржи.

У том смислу, потребно је напоменути да када се примени системски мултипотентне мезенхималне прекурсорима ћелија репопулације њихове деривате не само коштане сржи, али и других ткива, који се користи, нарочито за генску терапију. Показано је да након интравенског давања великих количина МСЦ са геном дивљег типа мишева са мутант колаген ген И донатора ћелије замени до 30% ћелија у кости и хрскавице ткиво примаоца и трансфектованих месенхималне ћелије стем миша секретују ИЛ-3 људско, 9 месеци ефикасно подржавајући хематопоезе у случају њиховог истовременог давања са људским хематопоезних матичних ћелија исувише имунодефицијентних мишева.

[3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10]

Генетска модификација мезенхималних матичних ћелија

Додатна експериментални успех генетске модификације треба напоменути МСЦ трансфекцију Фацтор ИКС ген код хуманих МСЦ праћено трансфером ћелије трансфектанти имунодефицијентних мишева, што доводи до појаве крвног антихемофилних Фактор Б током 8 недеља након трансплантације. У овом експерименту посттранслацијска модификација фактора ИКС са γ-глутамил карбоксилазом је изведена у трансфектованим ћелијама. Трансдукција МСЦ са хуманог фактора ретровирусни вектор кодирање ИКС, је била мање успјешна - накнадна увођење ових ћелија са хемофилијом псом у терапеутском нивоу фактора ИКС, који подржава нормално хемостазе интензитет коагулације, само 12 дана.

Трансплантација мезенхималних матичних ћелија у паренхиму мозга животиња показала је да се донорне ћелије не трансформишу у популацији неурона и глије. Прихватања калема неуронске деривати здравог даваоца мезенхималне ткиво теоретски омогућава корекцију генетских абнормалности у метаболизму мозга код болесника са Гауцхер болести и других поремећаја у метаболизму масти, угљених хидрата или ганглиозидима.

Настављајући експерименталним условима претраге трансдифферентиатион матичних ћелија у коштаној сржи строме прекурсорских ћелија у нервном и јетре ткива. Пажња истраживача усмерена на комбинацији диференцијације индуктора и специјалних условљених окружења. Конкретно, за изоловање примарну културу са 10% феталним говеђим серумом, коштане сржи стромалних ћелија испране и ресуспендоване у ДМЕМ / Ф12 медијуму културе (1/1) су засејане у густини од 200.000 / цм2. Након 24 сата, нонадхерент ћелије су уклоњене и причвршћен за пластичне ћелијама фибробласта култивишу током недељу дана. За диференцијацију коштане сржи стромалних ћелија Неуробласти користе кондиционирана подлога добијен култивацијом тродневну културу примарне мишје ембрионске фибробласта, као и међу ДМЕМ / Ф12 (1/1) са 2% феталног телећег серума и допуњена са 20 нг / мл или 10-6 М ЛиФ -ретинска киселина (неироиндуктори које се примењују на неуронске диференцијацијом мишје ембрионске матичне ћелије и човека). Диференцијација коштане сржи стромалних ћелија у родитељских ћелија у хепатоцитима је индукована условљену амбијенту створеном због тродневне култивисање примарну културу ембрионалних ћелија миша јетре у ДМЕМ / Ф12 (1/1) медијум са додатком 10% феталног телећег серума.

Овде треба поново имати у виду да формирају колоније коштане сржи стромалних ћелија хетероморпхиц и може се поделити на два типа. Први тип укључује фибробласта формирање ћелија филоподиа са великим једрима и један или два нуцлеоли. Други тип представљају мале ћелије облика вретена. У обе врсте ћелијске културе у условљеном подлози прибављених хранљиви слој основног мишје ембрионске фибробласта и на З-4-тх дана ћелија култури појављују Слично Неуробласти. У овој фази они често имају облик у облику вретена са једним или два дугачка процеса који се завршавају филоподијом. Пирамидне или стелатне ћелије са кратким дендритима су мање честе. Дендрити један Неуробласти имају типичан експанзију (раст бубрега) и грана у својој дисталном делу, а други - са изразитим Конуси раста филоподиа, кроз који се јавља раст дендрите. Сличне морфолошке особине (пирамиде раста бубрега и филоподиа а) инхерентна неуробластома, диференцирају у неуроне, су детаљно описани у новинама по Неурогенеза. На тој основи, неки аутори су закључили да су откривени у култури ћелија су Неуробласти. Конкретно, Сцхегелскаиа Е. Ет ал (2002), након примарне културе стромалних ћелија култивисаних две недеље у замењиве у свакој З-анд-4. Дан кондиционираној подлози утврдио да део пролиферацијом, задржавање једнолику стање. Споља, ове ћелије личили фибробласта, и идентификована у култури заједно са Дифферентиатинг Неуробласти. Већи део ћелија (око 80%) су у различитим фазама диференцијације у нервне ћелије ткива углавном у неуронима. Дендритске Процеси ових ћелија у блиском контакту са другом, тако да се постепено ћелије формиране на подлогу порције неуронске мреже у облику дугачких ланаца вишећелијским. Дендритиц бодље Неуробласти постати много дуже, неки од њих у 8-10 пута веће од дужине тела неурона. Постепено повећава се проценат пирамидалних и звезданих ћелија. Дендрити звезданих ћелија разгранатих. Према ауторима, касније диференцијацију пирамидалних и стелатним ћелијама у поређењу са танке одговара секвенци нормалних фаза Неурогенеза код животиња. Као резултат тога, аутори закључују да су матичне ћелије коштане сржи стромалних ћелија изложених индуковано Неурогенеза у којима процес ин витро генерисаним Неуробласти из све три главне врсте неурона. Прекурсори нервне ћелије су пронађени у култури коштане сржи стромалних ћелија 3-4 дана у медијуму са 2% феталним серумом и 20 нг / мл ЛИФ. Али у овом случају, матичне ћелије су подељени веома споро, диференцијација Неуробласти јавља само у 30% случајева, а они не формирају неуронске мреже. Користећи као нервних ћелија диференцијације индуктори ретиноичном киселином, аутори добијених у култури на 25-30% нервних ћелија са превласт глијалних ћелија - астроцитима и олигодендроцита. Неурони су само трећина свих нервних ћелија, иако су представљене све три врсте: фусиформ, пирамидална и стелатним ћелије. На 6. Дан култивисања стромалних ћелија у ретинолска киселој средини нервних ћелија постала диференцирана, а пронађени су појединачни аксона пирамидалних неурона који у нормалном неуроонтогенесис појавити касније формирање дендритских процеса. Према ауторима, упркос ниској принос нервних ћелија, поступак за индукцију ретиноинску киселину има своје предности: астроците и олигодендроците и миелинатинг управљати функцијама фид током раста аксона и дендритима и неопходни су за формирање нормалан нервног ткива. Стога, да поправи своје оштећених места у виво неурона бољем коришћењу суспензије обогаћеног глијалним ћелијама.

У другој серији експеримената, аутори су покушали да индукују диференцијацију стромалних ћелија коштане сржи у ћелије јетре. Након тродневног културе коштане сржи строме матичних ћелија у условљеном медијуму добијеног инкубацијом мишје ембрионске хепатоците, пронађени су велики, сферични облика ћелије, често две нуклеарне, цитоплазматичне инклузије са различитим величинама. Ове ћелије су биле у различитим стадијумима диференцијације и разликовале су се по величини, броју језгара и укључивања у цитоплазму. У већини ових ћелија откривен је гликоген, на основу ког су их аутори идентификовали као прогениторске ћелије хепатоцита. Од културе ниједан ћелије су детектоване Слично Неуробласти, следи закључак да у условљеном медијуму добијеног култивације ембрионске хепатоците, не постоје фактори диференцијације нервних ћелија и обратно, постоје фактори који индукују диференцијацију костне сржи стромалних ћелија у родитељских ћелија хепатоцита . Аутори указују на присуство плурипотентних ћелија из коштане сржи строма, јер диференцирају ин витро у ћелије јетре или нервно ткиво овисно о специфичним кондиционирана подлога и калемова.

У неким истраживањима заиста исправно показује диференцијацију коштане сржи стромалних ћелија у кардиомиоцитима, ћелије хрскавице, костију и нервног ткива. Постоје подаци да међу ћелијама коштане сржи постоје популације матичних ћелија које могу да се разликују у хепатоцитима. У светлу ових резултата наведених експеримената на мишевима и даље може бити сматрати једна потврда присуства у коштаној сржи плурипотентне мезенхималне матичних ћелија које имају способност да диференцирају у ћелије различитих ткива организма одраслих.

Трансплантација мезенхималних матичних ћелија

У клиничком трансплантације хумане месенхималне матичних ћелија могу користити за проширење хематопоетских матичних ћелија и њихови ране потомци прекоммитированних. Посебно, увођење аутологих хематопоезних матичних ћелија и оболелих МСЦ рака након хемотерапије по хигх-убрзава опоравак неутрофила и тромбоцита у периферној крви. Аутологна и алогена трансплантација месенхималне матичних ћелија се користе за лечење мултиплог мијелома, апластична анемија, спонтана тромбоцитопенија - болести повезаних са примарни дефект хематопоезе строме ткива. Ефикасност терапије ћелија код хематолошких патологија у многим случајевима наведеним, а увођење строме и хемопоиетиц матичних ћелија, која испољава смањење постоперативном периоду опоравка, крви, смањење броја смртних случајева на не-селективне регионалних и циркулишу ћелија карцинома уништења у којој умре и сопствених родитељских ћелија хематопоетске пацијената. МСЦ обећавају апликација и других мултипотентне мезенхимална прекурсорима ћелија у клиничкој пракси због њиховог релативно једноставног добијања коштане сржи аспирати, ширење културе и трансфекцију терапеутског гена. Тако да компензује дефекти локалног ткива могу користити локалну имплантацију мултипотентне месенхималне прекурсора ћелија и системску дисфункцију ткива мезенхималног порекла није искључено њихово увођење у општој циркулацији.

Опрезнији у својим аргументима Аутори радова у којима су перспективе МСЦ за локалну, системску трансплантације и генском терапијом анализирана са становишта биологије стромалних ћелија. Постнаталне коштане сржи се традиционално сматра тијело састављено од два главна система различитих ћелијских линија - заправо хематопоезе ткиву и припадајућу пратеће стромом. Стога, коштане сржи мезенхималне матичне ћелије првобитно сматрати само као извор строме основе за производњу регулаторних фактора хематопоетске микроокружења. Затим је пажња истраживача прешла на проучавање улоге МСЦ-а као изворног извор скелетних ткива. Најновији подаци указују на неочекиван потенцијал диференцијације стромалних ћелија коштане сржи формирањем неуронског или мишићног ткива. Другим речима, мезенхималне матичне ћелије испољавају трансгермалнуиу пластичност - способност да диференцирају у ћелијске типове да фенотипски нон-оригинални ћелије ткива. Међутим, неки аспекти биологије коштане сржи стромалних ћелија остају нејасни и нерешени уопште биолошком плану, а у неким детаљима, укључујући идентификацију, природа, порекло и развој и функција ин виво коштане сржи стромалних ћелија, као и дозвољену потенцијални диференцијације ек виво и могућност терапеутска употреба ин виво. Подаци о потенцијалним могућностима МСЦ, као и резултати испитивања осталих регенеративним потенцијала матичних ћелија, у оштром контрасту са утврђеном догми биологије.

Када се гаје у ниском густином коштане сржи строме матичних ћелија формирају различите колоније, од којих је сваки дериват једног од прекурсора ћелија. Проценат строме ћелијских прекурсора у сржи једром ћелијама коштане дефинише њихове способности да формирају колоније увелико зависи од услова културе и врсте на МСЦ припадају. На пример, у глодара се постигла максимална количина стромалних родитељских ћелија апсолутно неопходно у присуству озраченог напојног културе коштане сржи и серума, а које формирају колоније ефикасност хуманих мезенхималне матичних ћелија је независна од хранилице, или медијума културе. Број познатих митогених фактора који стимулишу пролиферацију стромалних прогениторних ћелија је ограничен. Ово укључује ПДГФ, ЕГФ, ФГФ, ТГФ-б, као и ИГФ1. Под оптималним условима, узгајање МСЦ поликлонална линије одржавају ин витро за поделе више од 50 ћелија, што омогућава да прима милијарде коштане сржи стромалних ћелија у 1 мл аспирата ит.

Међутим, становништво коштане сржи стромалних ћелија је хетерогена, што се манифестује као варијабилност на величинама колонија, различитим степеном њиховог формирања и разне морфологију ћелија, која обухвата низ фибробласта-лике вретена великим равним ћелија. Са развојем таквих усјева након 20 дана забележена је и фенотипска хетерогеност. Део колоније карактерише висока експресија алкалне фосфатазе, други га не изражавају, а колоније трећи тип су фосфатазопозитивними у централном региону и фосфатазонегативними на периферији. Појединачне колоније формирају кост нодуле (почетак матрица минерализацију означене бојењем ализарин црвеним или калцијум Ван Косса). У другим колонијама се врши акумулација масти, идентификована Г-бојењем црвеним уљима. Мање често, колоније месенцхималних матичних ћелија чине хрскавице које су обојене бојом алцијанове плаве.

После ванматеричне трансплантације у експерименталним животињама поликлонална МГК линије формирају ванматеричну кости строму са сетцхатообразнои повезан са миелопоиесис и адипоците, такође, али ретко са хрскавице. У моноклонског линија трансплантације коштане сржи стромалних ћелија у неким случајевима химеризму, при чему је де ново формирана коштано ткиво састављено од коштаних ћелија, адипоцити састоји строму и донатора порекло, док ћелијске линије хематопоезе и васкуларни систем су изведене из примаоца.

Резултати ових студија потврдјују природу стомачног прекурсора стромалне коштане сржи, од које је добијена клонска линија. Истовремено показују да нису све клонирање у ћелијама за културу стварно мултипотентне матичне ћелије. Неки истраживачи верују, и делимо своје мишљење, да су највише тачне информације о стварном потенцијалу диференцијације појединих клонова може се добити само ин виво после трансплантације, него одређивањем фенотип њихових деривата ин витро. Експресија у остео- култури фенотипских маркера хондро- или адипогенезе (одређује мРНК или преко ХИСТОХЕМИЈСКА техника), па чак производња минерализованом матрица не одражава степен плурипотенцију једног клона ин виво. Стога је идентификација матичних ћелија у групи стромалних ћелија могуће само постериори, под одговарајућим условима биолошког теста трансплантације. Конкретно, цхондрогенесис веома ретко примећено у трансплантацији отвореним системима, док је формирање хрскавице није необично у затвореним системима, као што дифузних коморе или у микромассних културама стромалних ћелија ин витро, при чему достигао локално ниску напетост кисеоника, доприносе формирању хрскавице. Дакле, чак и трансплантација техника, као и неспецифични ин витро условима културе значајно утичу на опсег диференцијације МСЦ.

Експериментална трансплантација са поштовањем датих експерименталних услова је златни стандард за одређивање потенцијала за диференцијацију стромалних ћелија коштане сржи и кључни елемент њихове исправне идентификације. Историјски, студије трансплантације стромалне коштане сржи коштане сржи су повезане са заједничким проблемом трансплантације коштане сржи. Утврђено је да се хемопоетска микрооконвенција ствара трансплантацијом стромалних ћелија коштане сржи и обезбеђује ектопички развој хемопоетског ткива у зони трансплантације. Порекло микрооколини донора и хематопоетског ткиво - од домаћина може сматрати истински ванматеричне кости "обрнутог" трансплантације коштане сржи. Локална трансплантација стромалних ћелија костне сржи промовише ефикасну корекцију костних дефеката, израженије него код спонтане репаративне регенерације. У неколико преклиничким студијама код животињских модела убедљиво доказао могућност трансплантација коштане сржи стромалних ћелија у ортопедији, али да оптимизује ове методе, чак иу најједноставнијим случајевима, захтевају највише пажљиву рад и анализе. У посебним, оптималним условима за проширење ек виво остеогених строме ћелије још нису сет, без издувних Структура и састав идеални носилац и број ћелија потребних за регенерацију запремине костију.

Поред примене пропагирају ек виво коштане сржи стромалних ћелија за регенерацију ткива мезенхијалног порекла неортодоксно дуктилоност МСЦ отвара потенцијалну употребу за регенерацију нервних ћелија, односно испоруке производа гена у ЦНС. У принципу, ово поједностављује ћелијску терапију у поразу нервног система, с обзиром да нема потребе да се аутологне неуролошке матичне ћелије добију од људи. Известио о могућности коришћења коштане сржи за генерисање кардиомиоцитима и миогениц претходнике као истински строме тако внестромалного порекла.

У току су експерименти на системској трансплантацији стромалних ћелија коштане сржи за лечење обичних скелетних болести. Нема сумње да коштане сржи строме ћелије су популација одговорни за генетских поремећаја обољења скелета, што је добро илустровао преносног вектора користећи генетске информације ћелија, што доводи до формирања патолошког коштаног ткива код експерименталних животиња. Међутим, способност стромалних ћелија за имплантацију, раст, размножавање и диференцирање у костима скелета након увођења у општи ток крви још није доказана.

То је делом због чињенице да стандардни поступак коштане сржи строме нису пресађено са хематопоезе ткивом, тако да строге критеријуме за оцењивање успешну прихватања калема за системску примену строме ћелије тек треба развити. Треба имати на уму да присуство маркер гена у екстрактима ткива или ослобађање у култури донаторских-изведеним ћелијама сведочи не прихватања калема ћелија, већ само о свом опстанку. Чак интра-артеријску ињекција коштане сржи стромалних ћелија у миша удова може довести до практично нула резултата прихватања калема, упркос чињеници да су донатори изведен ћелије налазе у великом броју у сржи мреже за микро- кости. Нажалост, такве ћелије се обично описују као "увезене" само на основу резултата одређивања гена донора марка под условима ек виво културе. Поред тога, неопходно је обезбедити убедљив доказ о дугорочној интеграцији у ткива диференцираних и функционално активних ћелија донорског порекла. У многим објављеним радовима, где се извештава о укрућивању стромалних ћелија коштане сржи у скелету, недостатак јасних података ове врсте је упечатљив. Ипак, треба напоменути да је у неким тачним експериментима на животињама успостављено ограничено али стварно узимање стромалних прогениторских ћелија након њиховог системског давања.

Ови подаци су у складу са резултатима студије о могућности испоруке коштане сржи миогениц родитељских ћелија у мишићима путем сосудргстуиу систем. Међутим, не треба заборавити да су и скелетни и мишићно ткиво се формира у току развоја и раста заснованог на екстраваскуларног ћелија померања који користе миграционих процеса који не укључују циркулацију крви. Ако у ствари постоји независна циркулаторни пут за доставу-предсхествоннрсхов ћелија у фази чврстог ткива, могуће је спречити постојање физиолошки циркулишућих мезенхималне родитељских ћелија? Шта је извор ових ћелија, како у земљама у развоју иу постнаталне организму, и како они продиру у васкуларни зид? Рјешавање ових питања је апсолутно неопходно и потребно је највише темељно пре клиничку анализу. Чак и после ће се наћи одговори на ова питања остају нерешена проблема кинетичке аспекте који се односе на скелета раст и преуређење везивног ткива. Истовремено, лечење поремећаја формирања кости заменом целокупну популацију мутираних скелетних родитељских ћелија здравим стромалних елемената представљају праву клиничку перспективу. У том случају, локални деформације или фрактура услед патолошких зона остеогенеза и коштаних деструктивним променама могу бити исправљене помоћу ин витро култивисане строме матичне ћелије. Сходно томе, правац будућих студија је препоручљиво да се фокусира на проблеме или корекцији генетичке трансформације мутирани аутологне ек виво остеогених прекурсор ћелије.

Генетски инжењеринг ћелија, привремено или трајно, постаје основа ћелије и молекуларној биологији, извор многих научних сазнања која се односе на улогу појединих протеина у ћелијског метаболизма ин витро супстанци и ин виво. Употреба молекуларних техника за корекцију наследних болести и људских болести је веома обећавајући за практичној медицини, јер својства строме коштане сржи матичних ћелија могла да се развије јединствени кругова трансплантацију за корекцију генетских обољења скелета. У том случају, мезенхијалног прогениторне ћелије могу бити прилично лако добити од будућег примаоца, они су подложни генетске манипулације и могу да се размножавају у великом броју у кратком временском периоду. Коришћење месенхималне матичних ћелија избегава ограничења и ризике везане за испоруку генетског информативног материјала директно пацијенту путем вртрусние векторским конструктима. Ова стратегија се примењује на пи ембрионалних матичних ћелија, али постнаталне аутологне коштане сржи строме ћелије - преферирани материјал јер њихова примена искључује могуће имунолошке посттрансплантатион компликације. Да би се постигла краткорочне ефекат, на пример, како би се убрзао регенерацију кости, оптимални метод генетска модификација месенхималне матичних ћелија употребом електропоратсрсх, хемијска фузије, липофекције, плазмида и аденовирусних конструката. Конкретно, вирусни трансфекција у коштаној сржи стромалних ћелија БМП-2 је ефикасна у убрзавању регенерацију кости у експерименталној Политраума. Стварање аденовирусних векторских структура је пожељно због недостатка токсичности. Међутим, генетска модификација стромалних ћелија коштане сржи у овом случају карактерише изузетно ниска стабилност. Надаље, нормалне трансформисани коштане сржи стромалне ћелије захтевају употребу векторних носача генетске информације 10 пута више заразне од осталих врста ћелија, што значајно повећава проценат смрти трансфектованих ћелија.

За лечење рецесивни болести узрокованих ниску или нулту биолошку активност одређених гена неопходна продужена или трајно модификацију месенхималне матичних ћелија, која захтева употребу адено-повезани вируси, ретровируса, лентивирусима и адено-ретровирус химера. Саобраћајна места ових вируса су способна да преносе велике трансфекције ДНК (до 8 кб). Научна литература се већ појавио информације о биолошке активности егзогених коштане сржи стромалних ћелија трансфектоване са ретровируса конструкције која кодира синтезу регулаторних молекула, и маркери - ИЛ-3, ЦД2, фактор ВИИИ, и ензиме који су укључени у синтези Л-ДОПА. Али у овим радовима аутори указују на број ограничења која морају бити превазиђена пре почетка практичне примене ове технологије. Први проблем је оптимизација процеса модификације ек виво МЦК. Познато је да продужена (3-4 недеља) пролиферација стромалних ћелија коштане сржи ин витро смањује њихову трансфекцију. Истовремено, потребно је неколико циклуса трансфузије како би се постигао висок степен генетске модификације МСЦ. Други проблем се односи на трајање експресије терапијског гена, који још не прелази четири мјесеца. Природно смањење ефективне експресије гена је последица инактивације промотера и смрти модификованих ћелија. У општој перспективе трансфера генетску информацију коришћењем мезенхимална матичних ћелија резултати прелиминарних истраживања указују на потребу даљег оптимизацију поступака трансфекције ек виво, одабиром адекватног промотор регулише биолошку активност у правом смеру, и побољшати способност модификованих коштане сржи стромалних ћелија на само обнављање ин виво након трансплантације. Треба напоменути да је употреба ретровирусних конструката за модификацију коштане сржи стромалних ћелија у жељеном правцу не захтева увек њихову обавезну прихватања калема. Трансфициране мезенхималне стем ћелија може обављати корективну функцију на позадини стабилне и боравка без потребе активног физичког инкорпорацију и функционисања у везивном ткиву. У том случају, они треба посматрати као биолошки мини-пумпе, производња ин виво фактор, недостатак који одређује манифестацију генетске болести.

Коришћење трансформисаних коштане сржи стромалних ћелија за лечење доминантне генетске болести која карактерише експресију гена или абнормалне патолошке биолошку активност, много је проблематично јер у том случају потребно је да блокира пренос или продају генетичке информације изобличен. Један од метода генетичког инжењеринга - хомологна рекомбинација од ембрионалних матичних ћелија да генеришу трансгене животиње. Међутим, изузетно низак ниво хомологне рекомбинантних, у комбинацији са проблемима идентификације, раздвајања и ширења таквих рекомбинантама је вероватно да промовише широку употребу ове технике у блиској будућности, чак и ако је развој нових технолошких метода. Други приступ генској терапији заснива се на доминантној патологију аутоматску корекцију оштећена ДНК као генетске мутације могу да исправе увођењем егзогене ДНК са жељеној секвенци (схорт ДНК олигонуклеотиде или химерних РНК / ДНК олигонуклеотидима) који се везују за хомолога у оштећеном геному. Трећи аспект обезбеђује патолошку браву информације Трансмисија која се постиже коришћењем посебно дизајнираних олигонуклеотида која везују одређеног гена да формира троструки спиралну структуру, што искључује могућност транскрипције.

Иако корекција генетских болести на нивоу генома је оптималан и пожељан терапеутски метод, мРНК је такође обећава вектор (можда још приступачнији) за блокирање доминантну негативну ген. У циљу инхибиције превод и / или повећану деградацију иРНК се већ дуго користе у протеинских молекула антисенс олигонуклеотид секвенци или везивање мРНК биосинтезе апарата ћелије пуне блокирања. Такође, двоструко-РНК индукује деградација иРНК брз, механизам који се још увек није у потпуности разјашњено. Међутим, мало је вероватно да ће само уклањање мРНК транскрибоване од мутиране алеле са кратким или појединачних мутација промовишу мРНК експресију нормалног алела. Алтернатива је употреба рибозинов хаммерхеад и шнала, имају способност да се веже за високо специфичним местима иРНК са накнадног изазивања њихове цепање и инактивацију током превођења. Тренутно се истражује могућност коришћења ове методе у лечењу патолошке остеогенезе. Без обзира на шта је циљ - геномске или цитоплазматичне елемената успех нове генске терапије технологије ће одредити ефикасност укључивања реагенаса у коштаној сржи стромалних ћелија ек виво, оптимални избор одређеног вектора и стабилну способности мезенхималне матичних ћелија које експримирају жељена факторе ин виво.

Тако откривање месенцхималних матичних ћелија са њиховим неочекиваним својствима ствара нову концептуалну шему за развој ћелијских линија. Већ разумети биолошка улога стромалног матичних ћелија, њихове природе, способност да трансдифферентиатион или дедиференцијација њихов физиолошко значај у процесу развоја ембриона, постнаталне раст, сазревање и старење, као и хуманих болести захтевају додатно интердисциплинарних истраживања.