Микроскопска анализа спутума

Микроскопска посматрање домаћих и фиксних обојених узорака спутума омогућава детаљан преглед његове ћелијске структуре и извесна мери одражава природу патолошког процеса у плућима и бронхија, своју активност, да би идентификовали различите влакнасти и кристални формирање, такође имају важну дијагностичку вредност, и коначно отприлике процени стање микробиолошка флора респираторног тракта (бактериоскопија).

Код микроскопије користите природне и обојене препарате спутума. Да проучавају микробиолошке флоре (размаза спутума) размази обично обојене са Романовски-Гиемса, Грам, и за детекцију Мицобацтериум туберцулосис већ Зиехл-Ниелсен.

Ћелијски елементи и еластична влакна

Од ћелијских елемената који се могу открити у спутуму пацијената са пнеумонијом, епителне ћелије, алвеоларне макрофаге, леукоцити и еритроцити су од дијагностичке важности.

Епителне ћелије. Скуамоус епител нема из уста, назофаринкса, гласних наборима и епиглотиса дијагностичку вредност, иако је детекција великог броја сквамозних ћелија, обично указује на ниску узорак квалитетан спутума доставља лабораторији и слине која садржи значајну нечистоћа.

Код пацијената са пнеумонијом, спутум се сматра погодним за испитивање ако, уз микроскопију са малим порастом, број епителних ћелија не прелази 10 у пољу вида. Већи број епителних ћелија указује на неприхватљиву доминацију у биолошком узорку садржаја орофаринкса.

Алвеоларни макрофаги, који у малим количинама може се наћи у сваком спутуму веће кавез ретикулогистиотситарного оригин ексцентрично налази близу Богати инклузије и језгро у цитоплазми. Ови укључивачи могу се састојати од ситних честица прашине (ћелија прашине), леукоцита и слично апсорбованих макрофага. Број алвеоларних макрофага се повећава са инфламаторним процесима у пулмонарном паренхиму и дисајним путевима, укључујући пнеумонију.

Ћелије цилиндричног цилирајућег епитела који покривају слузницу грчке, трахеје и бронхија. Изгледају као издужене ћелије, проширене на једном крају, где се налазе језгро и цилиа. Целлс цилиндрична прекривен цилијама епител наћи у сваком спутум, али њихов раст показује оштећења бронхија слузокожу и трахеје (акутни и хронични бронхитис, бронхиектаза, трахеитис, ларингитис).

Леукоцити у малим количинама (2-5 у виду вида) налазе се у било ком спутуму. Када запаљење плућног ткива или бронхијалне слузокоже и трахеја, нарочито када су суппуратион (гангрене, абсцесс плућа, бронхиектасис), њихов број је значајно повећан.

Када се мрље препарати спутума према Романовски-Гиемса, могуће је разликовати појединачне леукоците, који понекад имају важну дијагностичку вредност. Стога, када се експресују плућне инфламације или бронхијалних повећава слузнице ткива као укупан број неутрофила и броја дегенеративних облика фрагментације језгара, и уништење цитоплазми.

Повећање броја дегенеративних облика леукоцита је најважнији знак деловања запаљеног процеса и тежи ток болести.

Еритроцити. Појединачни еритроцити се могу практично детектовати и сваки спутум. Значајан пораст се примећује када је васкуларна пропустљивост смањена код пацијената са плунима, са уништавањем плућа или бронхијалног ткива, стагнацију у малом кругу циркулације, инфаркт плућа итд. У великом броју црвених крвних зрнаца у спутуму се налазе током хемоптизе било којег генезе.

Еластична влакна. Још један елемент елемената пластичних влакана из спутума који се појављују у спутуму када треба уништити плућно ткиво (апсцес плућа, туберкулоза, дезинтеграциони рак плућа итд.). Еластична влакна су представљена у спутуму у облику танких двокрвних, завиханих филамента са дихотомном поделом на крајевима. Појава еластичних влакана у спутуму код пацијената са тешком пнеумонијом указује на појаву једне од компликација болести - апсцеса плућног ткива. У неким случајевима, приликом формирања плућног апсцеса, еластична влакна у спутуму могу се детектовати и мало раније од одговарајућих радиографских промјена.

Често, са крупном пнеумонијом, туберкулозом, актиномикозом, фибринозним бронхитисом у препаратима спутума, могу се открити танка влакна фибрина.

Знаци активног запаљеног процеса у плућима су:

1. природа спутума (муцопурулентног или гнојног);
2. повећање броја неутрофила у спутуму, укључујући њихове дегенеративне облике;
3. повећање броја алвеоларних макрофага (од појединачних кластера више ћелија у видном пољу и више);

Појава у спутуму еластичних влакана указује на уништавање плућног ткива и формирање апсцеса плућа.

Коначни закључци о присутности и степену активности упале и уништавања плућног ткива формирају се само када се упореде са клиничком слику болести и резултатима других лабораторијских и инструменталних метода испитивања.

[1], [2], [3], [4], [5]

Микробна флора

Микроскопска маса, обојана према Граму, и проучавање микробиолошке флоре (бактериоскопија) у делу болесника са пнеумонијом, омогућено је успостављање највероватнијег узрочника плућне инфекције. Овај једноставан метод експресивне дијагностике патогена није довољно прецизан и треба га користити само у комбинацији са другим (микробиолошким, имунолошким) методама испитивања спутума. Уроњена микроскопија мрљених мрља је понекад веома корисна за хитну селекцију и примену адекватне антибиотске терапије. Међутим, треба имати у виду могућност контаминације бронхијалног садржаја микрофлоре горњих дисајних путева и усне шупљине, посебно када је сакупљање спутума нетачно.

Због тога се спутум сматра погодним за даље испитивање (бактериоскопија и микробиолошки преглед) само ако испуњава следеће услове:

• Грејање у пљуцу открива велики број неутрофила (више од 25 у видном пољу са малим увећањем микроскопа);
• Број епителних ћелија, више карактеристични за садржај орофаринкса, не прелази 10;
• у припреми је доминација микроорганизама истог морфолошког типа.

На грам мрље спутума у бриса понекад бити довољно да се идентификују грам пнеумококе, стрептокока, стафилокока и грам-негативне бактерије групу добра. - Клебсиеллу, ванд Пфеиффер, Е. Цоли и друге грам-позитивне бактерије у овом случају постају плаве и Грам - црвено.

Бактеријски патогени пнеумоније

Грам-позитиван	Грам-негативни
Пнеумоцоццус Стрептоцоццус пнеумониае. Стрептококки Стрептоцоццус пиогенес, Стрептоцоццус вириданс. Стафилококки: Стапхилоцоццус ауреус, Стапхилоцоццус хаемолитицус.	Клебсиелла  ( Клебсиелла пнеумониае) Хемофилус инфлуензае (Пфеиффер) Хаемопхилиус инфлуензае Псеудомонас аеругиноса  (Псеудомонас аеругиноса) Легионелла (Легионелла Пнеумопхилиа) Е. Цоли (Есцхерицхиа цоли)

Пре спутум директно је најлакши начин верификације пнеумоније патогена и има одређену вредност за избор оптималне антибиотске терапије. На пример, када детектује мрље бојени Грам, громполозхителних диплоцоцци (пнеумококе) или стафилококе уместо антибиотика широког спектра, који повећавају ризик од селекције и размножавања микроорганизама аитибиотикорезистентних могуће доделити циљану терапију, активни против стафилокока, или пнеумокока. У другим случајевима, детекција доминантне флоре у Грам брисева могу указати пас које узрокују пнеумонију Ентеробацтериацеае су грам-негативни (Клебсиелла, Е. Цоли, итд), која захтева одговарајуће дестинације циљану терапију.

Међутим, оквирни закључак вероватног узрочника плућне инфекције микроскопијом може се вршити само на пас значајно повећање бактерија у спутума, у концентрацији од 10 ⁶ - 10 ⁷  ћелија микроба / мл или више (ЛЛ Висхњакова). Ниске концентрације микроорганизама (<10 ³  м.кс / мл) су карактеристичне за пратећу микрофлоро. Уколико је концентрација ћелија микроба креће од 10 ⁴  до 10 ⁶  ћелија микроба / мл, не искључује етиолошки улогу овог микроорганизма у настанку плућне инфекције, али га не доказује.

Такође треба запамтити да "атипични" интрацелуларни патогени (микоплазма,  легионела, кламидија, рицкеттсиа) не мрље Грамм. У овим случајевима може доћи до сумње да постоји "атипична" инфекција ако су узорци показали дисоцијацију између великог броја неутрофила и изузетно малих бројева микробиолошких ћелија.

Нажалост, поступак одликује микроскопије и генерално прилично ниском осетљивошћу и специфичношћу. Не може предвидети вредност чак и против пнеумококе су добро донио једва достиже 50%. То значи да је половина метода даје лажне позитивне резултате. То је због неколико разлога, од којих је један и чињеница да је око 1/3 пацијената пре хоспитализације примили антибиотике, што у великој мери смањује ефикасност спутум директно. Штавише, чак иу случају позитивних резултата студије, указује довољно високу концентрацију на размаз "типични" бактеријски патогени (нпр пнеумокока), не у потпуности искључује присуство ко-инфекције "атипични" интрацелуларне патогени (Мицопласма, Цхламидиа, Легионелла).

Метода бактериоскопије размаза спутума, обојеног Грамом, у неким случајевима помаже у верификацији узрочника плућа, иако обично има врло ниску предиктивну вредност. "атипичне" интрацелуларни патогени (Мицопласма, легионеле, Цхламидиа, Рикеције) нису верификовани од стране микроскопом јер нема грам мрље.

Требало би поменути могућност микроскопске дијагнозе код пацијената са пнеумонијом гљивичне инфекције плућа. Најрелевантнији за пацијенте који примају продуженог лечења антибиотицима широког спектра, је детекција нативни или микроскопија обојене спутума Цандида албицанс у облику ћелија квасца и гранање на мицелија. Они указују на промену микрофлоре трахеобронхијалног садржаја, који се јавља под утицајем третмана антибиотиком, што захтева значајну корекцију терапије.

У неким случајевима код пацијената са пнеумонијом постоји потреба да се постојећа плућна болест диференцира са туберкулозом. За ту сврху користе боју размазног Зиехл-Ниелсен, која у неким случајевима омогућава идентификацију Мицобацтериум туберцулосис, али негативан резултат такве истраге не значи одсуство ТБ пацијената. Када се обарају спутум према Тсил-Ниелсен-у, микобактеријска туберкулоза је обојена црвеном бојом, а сви остали елементи плућа су плави. Туберкулозне микобактерије имају изглед фецеса, равних или благо закривљених штапова различитих дужина са одвојеним згушњавањем. Они се налазе у припреми у групама или појединачно. Дијагностичка вредност је откривање у припреми чак и појединачне туберкулозе микобактерија.

Да би се повећала ефикасност микроскопске детекције микобактерија туберкулозе користите низ додатних метода. Најчешћи од њих је тзв метода флотација, у којој хомогенизује испљувак мућка са толуол, ксилол или бензен, која капи, површину, снимање микобактерије. Након поравнања спутума, горњи слој се пипетира на клизач. Онда је лек љепотан и умазан од стране Тсилиу-Ниелсен-а. Постоје и друге методе акумулације (електрофорезе) и микроскопије бактерија туберкулозе (луминесценцијска микроскопија).

Микроскопски преглед (анализа) слузи омогућава детекцију слузи, ћелијских елемената, влакнастих и кристалних формација, гљивица, бактерија и паразита.

Ћелије

• Алвеоларне макрофаге су ћелије ретикулогистоцитног порекла. Велики број макрофага у спутуму је детектован у хроничним процесима иу фази разрешавања акутних процеса у бронхопулмоналном систему. Алвеоларне макрофаге које садрже хемосидерин ("ћелије срчаних дефеката") откривају се са благим инфарктом, хеморагијом, стагнацијом у малом кругу циркулације. Макрофаги са липидним капљицама су знак опструктивног процеса код бронхија и бронхиола.
• Ксантомске ћелије (масни макрофаги) се налазе у апсцесу, актиномикозама, ехинококози плућа.
• Ћелије цилиндричног цилированог епитела су ћелије слузнице мембране ларинкса, трахеје и бронхија; пронађени су код бронхитиса, трахеитиса, бронхијалне астме, малигних неоплазми плућа.
• Плоски епител се открива када плитка улази у спутум, нема дијагностички значај.
• Леукоцити у једној или другој количини су присутни у било ком спутуму. У муцопурулентном и гнојном спутуму откривен је велики број неутрофила. Еозинофили су богати спутумом код бронхијалне астме, еозинофилне плућа, глотис плућних лезија и инфаркта плућа. Еозинофили могу се појавити у спутуму за туберкулозу и карцином плућа. Лимфоцити у великом броју су пронађени у великом кашљу и, ријетко, са туберкулозом.
• Еритроцити. Детекција појединачних црвених крвних ћелија у спутуму није дијагностички значај. У присуству свеже крви у спутума одређен неизмењене еритроците, ако спутума крви креће се налазе у респираторном тракту дуже време, открију лужи еритроците.
• Ћелије малигних тумора налазе се код малигних тумора.

Влакна

• Еластична влакна појављују се у распадању плућног ткива, које је праћено уништавањем епителног слоја и ослобађањем еластичних влакана; налазе се код туберкулозе, апсцеса, ехинококозе, неоплазме у плућима.
• Коронална влакна се откривају у хроничним болестима плућа, као што је каверноза туберкулоза.
• Калцинирана еластична влакна су еластична влакна импрегнирана калцијумовим солима. Детекција њих у спутуму је карактеристична за распад туберкуларног петрикитиса.

Спирале, кристали

• Курсхманске спирале формирају се у спастичном стању бронхија и присуство слузи у њима. У току кашља, вискозна слуз се пушта у лумен већег бронхуса, увијајући у спиралу. Курсхманске спирале се јављају са бронхијалном астмом, бронхитисом, туморима плућа, компресијом бронхија.
• Кристали Цхарцот-Леиден су производи пропадања еозинофила. Обично се појављују у спутуму који садржи еозинофиле; карактеристичне су за бронхијалну астму, алергијске услове, еозинофилне инфилтрате у плућима, плућне болести.
• Кристали холестерола се јављају са апсцесом, плућном ехинококозом, неоплазмима у плућима.
• Кристали хематоидина су карактеристични за апсцес и гангрене плућа.
• Друмови актиномицете су детектовани у актиномикозама плућа.
• Елементи ехинококуса се јављају са ехинококозом плућа.
• Декор Диетрицх - груди жућкасто-сиве боје, имају непријатан мирис. Састоји се од детритуса, бактерија, масних киселина, капљица масти. Они су типични за апсцес плућа и бронхиектазе.
• Ехрлихов тетрад се састоји од четири елемента: калцификованог детритуса, калцифицираних еластичних влакана, кристала холестерола и микобактерије туберкулозе. Појављује се у распаду калцифицираног примарног туберцулар фокуса.

Микелијум и гљивичне ћелијске ћелије се јављају у гљивичним лезијама бронхопулмоналног система.

Пнеумоцистис се јавља са пнеумоцистис пнеумонијом.

Сферуле гљивица се откривају код кокцидиоидомикозе плућа.

Асцаридне ларве се откривају асцариазом.

Личара цревног црева се идентификује са јајомилидазом.

Јаја плућне болести идентификована је парагонимозом.

Елементи пронађени у спутуму код бронхијалне астме. Када се бронхијална астма обично раздваја малом количином слузног, вискозног спутума. Макроскопски можете видети спиралу Курсхмана. Када је микроскопско истраживање карактеристично за присуство еозинофила, цилиндричног епитела, постоје кристали Цхарцот-Леиден.