Дијагноза херпеса

Дијагноза херпеса се заснива на понашању класичне вирусног проливања у осетљиве ћелијске културе, имунофлуоресценце и серолошких метода обављања колпоскопским студија коришћењем савремених молекуларних-биолошке методе (ПЦР, дот-хибридизација), који вам омогућава да дијагностикујете сву херпесвируса групу, укључујући ХХВ-6 и ХХВ-7 врсте.

Методе лабораторијске дијагнозе херпетичне инфекције

Главне методе усмерене су на тајање ХСВ-а или откривање вирусних честица и / или њихових компоненти	Помоћне методе усмјерене на откривање антитела на ХСВ у биолошким течностима у људском организму
Изолација ХСВ у осетљивим културама ћелија и животиња Директна и имуноелектронска микроскопија Директне и индиректне МФА опције ИФА Молекуларне биолошке методе Реакција латексне аглутинације	Реакција неутрализације РСК Одређивање антитела на неструктурне протеине ХСВ-1,2

Показано је да 76% пацијената има генитални херпес (ГХ) узрокован ХСВ-2, а код 24% - ХСВ-1. А ГГ као моноинфекција се јавила само код 22% пацијената, у 78% случајева откривена су микробиолошка удружења. Код 46% болесника, откривена је паразитоценоза изазвана два патогена, укључујући 40% случајева хламидије. Мање често у сузама одређује гарднерелли, Трицхомонас, гонокоцци.

У 27% болесника, паразитоценоза је представљена са три, а 5,2% са четири патогена. И чешће је постојала комбинација кламидије са гарднерелима и гљивицама Цандида. Ови подаци оправдавају потребу за темељном бактериолошки прегледа пацијената ИИ се утврдиле комбинације патогеног агенса, као детаљну студију о патогенези мешовитих инфекција урогениталног тракта, који би омогућили да се диференцирано комплексне терапије ХСВ инфекције.

Материјали који треба проучавати у изолацији ХСВ у зависности од локализације херпетичних лезија

Локализација лезија	Садржај везикула	Чишћење ћелија				СДЦ	Аспират из бронхија	Биоптат	Крв
		1	2	3	4
Кожа	+								+
Очи			+						+
Гениталиа				+					+
Анус	+				+				+
Уста	+	+							+
ЦНС	+					+		+	+
Лагана		+					+		+
Јетра								+	+
Цонгенитал Херпес	+	+	+				+		+

Методе лабораторијске дијагнозе цитомегаловирусне инфекције

Методе	Време потребно за резултате	Напомене
ВИРУСОЛОШКИ
Електронска микроскопија	3 сата	Тумпинг
Изолација вируса у ћелијској култури (ЦПД)	4-20 дана	Стандард, Споро
Имунофлуоресцентно бојење раног АХ са моноклонским антителима	6 сати	Мање специфичних
ЦИТОЛОГИЧЕСКИЈ	2-3 сата	Мање специфичних
СЕРОЛОГИЧЕСКИЈ
РСК	2 дана	Стандарт
Ссубсистенце	1 дан	Лабориоус
РЕЕФ	6 сати	Једноставно, специфично
НФИФ	6 сати	Компликовано
РИМФ	6 сати	Компликовано
ИФА (ИгМ, ТО)	6 сати	Брзо, једноставно
Имуноблот	6 сати	Скупо
МОЛЕКУЛАРНО-БИОЛОШКИ
МГ	5-7 дана	Скупо, дуго времена
ПЦР	3 сата	Скупо

Методе за дијагностицирање вируса херпес зостер

Дијагностичке методе	Лабораторијске технике
ИНДИРЕЦТ
Алокација	Фабрика културе, пилећи ембриони, лабораторијске животиње, ко-култивација са дозвољеним ћелијама или помоћним вирусима
Идентификација изолата	Реакција неутрализације, ДСЦ, ИФ, ИППЕ, реакција изолата талога, аглутинација, ИФ
ДИРЕЦТ
Цитологија	Смеарс: боја имунофлуоресценције
Хистологија	Патоморфологија ћелије
Структура	Ембрионална микроскопија, имуноелектронска микроскопија
Одређивање антигена	ИФ, ПИЭФ, РИМ, ИФА
Одређивање локалне производње антитела	Иг М, Иг Г, Иг А: ИФА, РИА
Молекуларни биолошки приступи	Молекуларна хибридизација, ПЦР

Лабораторијска дијагноза инфекције узрокована вирусом херпес зостер

Дијагностички проблеми	Методе	Очекивани резултати
Акутна примарна инфекција	1	Откривање након 2 сата
	2	Ниво антитела расте споро
	3	Присутни 3 дана након инфекције
Акутна реактивирана инфекција	1	Откривање УЛВ-а за 2 сата
	2	Ниво антитела расте споро
	4	Присутни су 4 дана након појављивања осипа

1. одређивање у флуиду везикула ВИЕФ-а;
2. серологија: ДСЦ, ЕЛИСА, са циљем идентификације
3. Серологија: ЕЛИСА, усмјерена на откривање ИгМ;
4. серологија: ЕЛИСА, намењена откривању ИгА, ИгМ.

Методе за индикацију имунолошког одговора инфекције због вируса херпес зостер

Приступ	Метод
Детекција повећаног титра антитела у другом серуму	РСК, РТГА, РПГА, реакција неутрализације ИФ, РИМ, ЕЛИСА
Детекција Иг Г, Иг А класе специфичних антитела у првом узорку серума	ИФА, ИФ, РИМ, латекс-аглутинација

Интерпретација резултата серолошког прегледа серумских пацијената на инфекције херпесвируса (ЕЛИСА)

Име инфекције / маркера	Просечни прагови за инфекције
	Резултати анализе	Тумачење
Цитомегали Анти-ЦМВ ИгГ (1-20 Е / мл) Анти-ЦМВ ИгМ (100-300%)	Позитивно 1-6 Позитивно 6-10 Позитивно> 10 Негативно Позитивно 100-300 Негативно <90 Доубтфул 90-100	Ремиссион Погоршање болести Акутна фаза болести Без инфекције (болести) Акутна фаза болести Поновите анализу после 2-3 недеље
Херпес симпле 1,2 серотипови Анти-ХСВ 1/2 укупно. (100-900%)	Позитиван 100-400 Позитиван 400-800 Позитиван> 800 Негативан <100	Ремиссион Погоршање болести Акутна фаза болести Без инфекције (болести)

Табела приказује главне методе лабораторијске дијагностике инфекција херпесвируса, а такође препоручује биолошке материјале који се испитују за изолацију ХСВ, узимајући у обзир локализацију херпесних лезија

Поуздан је алокација херпес симплекса и ЦМВ кроз инфекцију осетљивих ћелијских култура. Дакле, код виролошког прегледа 26 пацијената у периоду рецидива, ХСВ је изолован на осетљивој Веро ћелијској култури у 23 случајева (88,4%). У инфицираним културама примећен је облик цитопатског дејства карактеристичног за ХСВ-формирање мултинуклеозних гигантских ћелија или акумулација заобљених и увећаних ћелија у облику снопова. У 52,1% случајева, било је могуће открити жаришта цитопатског ефекта вируса за 16-24 сата након инфекције. До 48-72 сата инкубације заражених култура, проценат материјала који узрокује специфично уништење ћелија повећао се на 87%. И само у 13% случајева, позитивни резултати су откривени 96 часова након инфекције и више или са поновљеним прелазом.

Методе лабораторијске дијагнозе генерализоване херпетичне инфекције

Основне методе усмерене су на откривање (изолацију) херпесвируса, њихових честица и њихових компонената	Помоћне методе усмјерене на откривање антитела на херпес вирусе у биолошким течностима, откривање ензимских смјена у крвном серуму
Изолација херпес вирус на осетљиве ћелијске културе и животињског Директно и имуни електронском микроскопијом методом Директни и индиректни иммуноперокидасе реализацијама директног и индиректног опције флуоресцентни техника антитело опције ЕЛИСА остварењима молекуларних (ДНК-ДНК) хибридизацијом Полимерасе Цхаин Реацтион Реацтион латекс аглутинације	Неутрализација Реакција цомплемент фикатион Реакција латекса аглутинације Индиректна флуоресцентни метод антитело изведба индиректни метод иммуноперокидасе варијанта Остварења ЕЛИСА метод имуно блот радијално фиксирање комплемента поступку утврђивању висине аланин и аспартат нивоу

Да би се дијагностиковала инфективна мононуклеоза (инфекција коју је изазвао ВЕБ), користе се серолошке методе. Реакција Паул-Буннелиа са овцама еритроцита, титар 1:28, Диагностиц и изнад за једну студијску серума, или 4-струког пораста антитела приликом испитивања упареног серума. Користите Гофф-Бауерову реакцију суспензијом 4% формиране крвне ћелије коња. Резултат се узима у обзир након 2 минута, са инфективном мононуклеозом реакција је веома специфична.

Тренутно се развија ензимски имуноассаи (ЕЛИСА) за дијагнозу инфективне мононуклеозе. У овом случају, ИгГ и ИгМ антитела у серуму пацијента одређују се инкубирањем са лимфобластима инфицираним са ЕБВ, након чега следи лечење флуоресцентним антителима. У акутном периоду болести, антитела вирусног капсидног антигена одређују се у титру од 1: 160 и више.

Када користите низ увозних комерцијалних тест системима ИФА може идентификовати: антитела мрава Еган ЕБВ овојнице антитела раном антиген од ЕБВ, укупна антитела на раној антиген од ЕБВ, утврђене у акутној фази болести и у једру и цитоплазми, и ограничен антитела ЕБВ рано, одређен у акутној фази болести и у једру и цитоплазми ћелија, граничи антитела ЕБВ раног антигена утврђене усред болести само у цитоплазми ћелија и антитела нуклеарној антиген ЕБВ. Употреба ових тестних система омогућава диференцијалну дијагнозу већег броја болести повезаних са ЕБВ.

Након позитивног ЕЛИСА да идентификује антитела ЕБВ дају имуноблот потврђује одговор, који детектују присуство антитела на одвојене маркер ЕБВ протеина (П-протеина): П23, П54, П72 (присуство протеина указује на могућност репродукције ЕБВ), п 138. Саид изнад лабораторијских метода се користе за контролу ефикасности лечења.

Сензитивност виролошких метода је 85-100%, специфичност је 100%, време учења је 2-5 дана. Често у пракси Метод директне имунофлуоресценције (ПИФ) са поликлонска или моноклонска антитела против ХСВ-1 и ХСВ-2. Метода УИФ се може лако репродуковати у конвенционалној клиничкој лабораторији, није скупо, осетљивост је изнад 80%, специфичност је 90-95%. Би имунофлуоресцентна микроскопијом открио присуство цитоплазми инклузије, морфолошких карактеристика, проценат инфицираних ћелија у размазима, струже уретре, цервикалног канала, цервикс, ректум.

Метода УИФ даје идеју о морфолошким особинама ћелија и промјенама у локализацији ХСВ антигена. Поред директних знакова оштећења ћелија од херпес вируса (откривање специфичне луминесценце), постоје индиректни знаци херпетичне инфекције према подацима УИФ:

• агрегација нуклеарне материје, пилинг кариоолме;
• присуство тзв. Језгре "рупе", када само једна кариолемма остаје из језгра ћелије;
• присуство интрануклеарних инцлусионс - Цаудри теле.

Приликом постављања УИФ доктора добија не само квалитет, већ и квантитативну процену инфицираних ћелија које смо се користе за процену ефикасности антивирусне терапије са ацикловир (АЦ). Тако, 80 пацијената са једноставном гениталног херпеса (ГХ) је испитивао УИФ у динамици. Показано да уколико, пре третмана са ацикловира у брисева 88% пацијената има висок проценат инфицираних ћелија (50-75% и изнад), након један курс ацикловира у размаза 44% пацијената са здравим ћелијама откривеним у 31% случајева су означени појединачне инфициране ћелије и 25% пацијената је имало до 10% заражених ћелија.

Садржај заражених ћелија у мрљама (ПИФ реакција) пацијената са гениталним херпесом, лечених ацикловир

Периоди болести	Проценат у размазама
	Заражене ћелије					Нормалне ћелије
	Више од 75%	50-75%	40-50%	10%	Једне ћелије у н / сп
Релапсе (пре лечења)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Ремисија (после лечења)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Користећи много година УИФ-а и методу хибридизације тачака, готово 100% случајева поклопило се са резултатима студије. Треба напоменути да је у циљу повећања поузданости дијагнозе ГХ, нарочито у случајевима када постоји субклимчка и маломанифестних облици херпеса, препоручљиво је да се користи 2-3 метод лабораторијске дијагностике, нарочито приликом разматрања труднице, жене са акушерске историје угрожене, особе са неодређено гинеколошко дијагнозе.

Дакле, када је ПЦР дијагноза вирусно-бактеријских инфекција урогениталног тракта, неопходно је процијенити позитивне резултате добијене узимајући у обзир анамнезу, присуство (или одсуство) специфичних клиничких симптома болести. Ако се хламидија открије са ПЦР-ом, у овом случају је могуће говорити о инфекцији и сходно томе решити проблеме терапије. У случају откривања микоплазме (уреапласмас) су опортунистички патогени, потврдити дијагнозу се тражи да изврши културу даље студије, т. Е. Цроп материјал из пацијент осетљив на културама ћелија. Тек када се добију позитивни резултати у анализи културе, можемо говорити о лабораторијској потврђивању дијагнозе микоплазмозе. Иста метода ће омогућити, уколико је потребно, да одреди осетљивост изолованих микоплазми на често коришћене медицинске форме (антибиотике, флуорохинолоне итд.).

Можда је једнократна инфекција са неколико вируса породице Непресвиридае. Често смо открили инфекцију једног пацијента са ХСВ-1, ХСВ-2 и ЦМВ вирусима. Много чешће инфицирани са неколико херпес вируса били су пацијенти са клиничким и лабораторијским манифестацијама секундарног ИДС-а (пацијенти са онкогетолошким, онколошким, ХИВ-инфицираним). Стога се показује да клинички и имунолошки поремећаји који напредују с ХИВ инфекцијом праћени су повећањем броја херпесвируса детектованих молекуларном хибридизацијом. У овом прогностички најзначајнијем случају може се сматрати сложена једночетна детекција ДНК типа ХСВ-1, ЦМВ и ХХВ-6.

[1], [2], [3]