Имунофенотипизација хемобластоза

Значајан напредак у хематолошких студијама удружених последњих година уз коришћење савремених имунолошких метода и аутоматизоване алатке за анализу и сортирање ћелија периферне крви и коштане сржи - цитометерс протока. Традиционална морфолошки и цитохемијских студија обољења супстрата ћелија (крв, црвено коштане сржи, лимфних чворова, слезине, итд), у многим случајевима, нарочито у лимфопролиферативним болести, не откривају читав низ опција међу морфолошки сличних облика и идентификује порекло патолошког клона . Ови проблеми се могу решити само проучавањем имунолошких карактеристика ћелија. Свака фаза диференцијације хематопоетских ћелија има сопствени скуп антигена који су на међународној класификацији познат као диференцијације и диференцијације су подељени у кластере, означеном ЦД.

У блоку диференцијације неопластичних промена могу јавити у било којој фази развоја нормалног ћелија, што доводи до патолошке ћелијски клон дефинисање болест подлоге и имају исти имунолошком (или фенотипска) карактеристика. Након студија ових маркера у ћелијама може одредити било ком облику или облику болести су конзистентни, тј на основу имунолошке ћелије фенотип диференцијалној дијагнози, што је најтеже у лимфопролиферативним поремећајима, јер главни ћелије супстрата патолошким болести су скоро исти тип ћелија морфолошки.

Фенотипизација дозвољава употребу моноклонска антитела типичан Бластиц ћелије и зреле мијелоидну крви, моно-, лимфоцитни серију у присуству диференцијације антигена (рецепторе) у ћелијском зиду. У делу "Евалуација имунског статуса организма" делимично су описане карактеристике и дијагностички значај ћелијских маркера; Доле је кратак опис антигенских ћелијских маркера примењених на дијагнозу хемобластозе. На мембранама крвних зрнаца и црвеној коштаној сржи могу се идентификовати следећи антигени (маркери).

• ЦД2 је мономерни трансмембрански гликопротеин. Он је присутан на површини свих циркулирајућих Т-лимфоцита и неких НК-лимфоцита. ЦД2 учествује у процесу алтернативне активације Т-лимфоцита. Детекција ЦД2 помоћу моноклонских антитела у клиничкој пракси користи се за фенотипизацију акутних леукемија Т-ћелија, лимфома, хроничних инфламаторних и имунодефицијативних стања.
• ЦД3 - протеински комплекс повезан са антиген-специфичним Т-ћелијским рецептором, је главни функционални маркер Т-лимфоцита. Омогућава пренос активационог сигнала са мембране на цитоплазму ћелије. ЦД3 детекција је индикована за дијагнозу акутне Т-ћелијске леукемије, лимфома (ЦД3 није изражен у туморима лимфоида који нису Т-ћелије) и имунодефицијентних болести.
• ЦД4 - трансмембрански гликопротеин изражена подскуп Т хелпер (Индуцторс) који чине 45% од лимфоцита периферне крви. У раним фазама развоја лимфоцита у тимуса, ЦД4 антигени, као и ЦД8, изразила сва кортикалне лимфоците. Медуллари тхимоцитес, што је слично фенотип зреле ЦД4 + Т-ћелија периферне крви (хелпер Т ћелије), или већ изражавају ЦД4 или ЦД8 рецепторе. У периферној крви, до 5% ћелија истовремено се означавају ЦД4 и ЦД8. Мала експресија ЦД4 је могућа на неким моноцитним ћелијама. ЦД4 је изражен у већини случајева, лимфом Т ћелија, укључујући гљивичних микоза, и у ХТЛВ повезан Т целл леукемиа (ХТЛВ - хумани Т- лимфотропични вируса - Хуман Т лимфотропични вирус).
• ЦД5 - гликопротеин са једним ланцем, присутан на свим зрелим Т-лимфоцитима и већини тимоцита, слабо је изражен Б-лимфоцитима. ЦД5 је детектован на неопластичним ћелијама Б-ћелијске хроничне лимфоцитне леукемије и центро- цитичног лимфома. Код других врста малигних лимфних болести - фоликуларни лимфом, леукемија длакавих ћелија, лимфом великих ћелија - ЦД5 није изражен.
• ЦД7 је једноструки протеин, најранији маркер Т ћелијске диференцијације. Изражавају га про-Т-лимфоцити чак и пре него што се мигрирају у тимус. ЦД7 је детектован на већини НК ћелија, слаб монотонак се примећује на моноцитима. Б-лимфоцити и гранулоцити не садрже овај антиген. Дефиниција ЦД7 се користи за дијагнозу лимфома, дечије Т-ћелијске лимфобластне леукемије.
• ЦД8 је протеин који се састоји од два полипептидна ланца повезана са дисулфидним мостовима. Изражава се субпопулацијом цитотоксичних и супресорних Т лимфоцита, који чине 20-35% лимфоцита периферне крви. Овај антиген такође има НК лимфоците, кортикалне тимоците, 30% медуларних тимоцита и субпопулацију ћелија црвене коштане сржи. ЦД8 се испитује за квантитативну процену садржаја Т-супресора (види одељак "Т-лимфоцити-супресори у крви" горе).

• ЦД10 је ендопептидаза повезана са ћелијском мембраном. ЦД10 изражава младе облике Б лимфоцита и субпопулацију кортикалних лимфоцита. ЦД10 изражава све ћелије АЛЛ-а.
• ЦД11ц експресивни макрофаги, моноцити, гранулоцити, НК ћелије и ћелије левкемије на космичким ћелијама на ћелијској мембрани.
• ЦД13 је гликопротеин изражен мијеломоноцитним ћелијама (прогениторске ћелије, неутрофили, базофили, еозинофили, моноцити и ћелије миелоидне леукемије). Није присутан у Т и Б лимфоцитима, еритроцитима и тромбоцитима.
• ЦД14 је површински мембрански гликопротеин. Он се углавном изражава моноцитима и макрофагама. ЦД14 је детектован у више од 95% моноцита периферне крви и коштане сржи. Јака експресија ЦД14 је примећена код акутне миелобластне леукемије. Код акутне и хроничне лимфобластне леукемије, овај антиген није изражен.
• ЦД15 је олигосахарид. Учествује у процесима фагоцитозе и хемотакиса. Овај антиген је присутан на површини зрелих гранулоцита и Березовски-Стернберг ћелија. Израз ЦД15 антигена се детектује код Ходгкинове болести. У не-Ходгкиновим лимфомима, ЦД15 није откривен у већини случајева.
• ЦД16 је изражен на површини гранулоцита, моноцита, макрофага и НК ћелија. Сви лимфоцити који експримирају овај антиген имају способност за целуларну цитотоксичност зависну од антитела. ЦД16 се одређује приликом куцања хроничних миелоцитних леукемија, како би се карактеризирале НК ћелије.
• ЦД19 је гликопротеин присутан на свим периферним Б лимфоцитима, као и на свим прекурсорима Б ћелија. Није присутан на плазма ћелијама. Ово је најранији маркер Б-ћелија, игра важну улогу у регулисању активације и пролиферације Б-лимфоцита. ЦД19 се изражава на свим неопластичним ћелијама акутне леукемије Б-ћелијског порекла, а такође је присутан иу неким облицима акутне монобластне леукемије.
• ЦД20 је не-гликозиловани протеин. У онтогенези Б-лимфоцита, ЦД20 антиген се појављује након ЦД19 на стадијуму пре-Б-ћелијске диференцијације лимфоцита. Одсутан је на плазма мембрану ћелија плазме. Изражава се у АЛЛ, Б-ћелијској хроничној лимфоцитној леукемији, леукемији длакавих ћелија, Буркитовом лимфому и веома ретко у акутној монобластној леукемији.
• ЦД21 је гликопротеин, у значајној количини је присутан на Б-лимфоцитима у лимфоидним органима и у малој количини на Б-ћелијама периферне крви. ЦД21 је рецептор за Епстеин-Барр вирус.
• ЦД22 је протеин који се састоји од два полипептидна ланца. Изражава се на мембрани већине Б-лимфоцита, укључујући прогениторске ћелије (пролимфоците). Антиген се не изражава на Б-лимфоцитима (плазма ћелијама) након њиховог активирања. Најизраженији израз ЦД22 је детектован на ћелијама са леукемијом длакаве ћелије, слабе - код миелоидних леукемија и не-Т-ћелија АЛЛ.
• ЦД23 је гликопротеин изражен активним Б-лимфоцитима периферне крви у много већој мери. ЦД23 посредује цитотоксичност и фагоцитоза зависна од ИгЕа од стране макрофага и еозинофила.
• ЦД25 је једноглавни гликопротеин идентификован као рецептор ниског афинитета за ИЛ-2. Овај рецептор се изражава на активираним Т-лимфоцитима и, у мањој густини, на активираним Б-ћелијама. У периферној крви здравих људи, антиген је присутан у више од 5% лимфоидних ћелија.
• ЦД29 је рецептор фибронектина. Распрострањен је у ткивима, изражава се од леукоцита. Откривање ЦД29 на ћелијама периферне крви се користи за типизацију субпопулације Т ћелија које имају ЦД4 + ЦД29 + фенотип, који се зову помоћник типа 2 (Тх2). Ове ћелије, кроз производњу лимфокина, учествују у реализацији хуморалног имунског одговора.
• ЦД33 је трансмембрански гликопротеин. Он је присутан на површини ћелија миелодне и моноцитне серије. Налази се на површини моноцита и, у мањој мери, гранулоцита периферне крви. Око 30% ћелија црвене коштане сржи изражава ЦД33, укључујући и миелобласте, промиелоците и мијелоците. Антиген је одсутан на мембранама плурипотентних матичних ћелија. ЦД33 се користи за карактеризацију ћелија у миелоидним леукемијама. Леукемијске ћелије лимфоидног и еритроидног порекла не изражавају ЦД33.
• ЦД34 је фосфогликопротеин, изражен хематопоетским прогениторским ћелијама, укључујући монопотентне матичне ћелије. Најизраженији израз Ар се примећује у раним прогениторима; када ћелије зоре, израз маркера пада. ЦД34 се такође налази на ендотелијалним ћелијама. ЦД34 се користи за карактеризацију ћелија код акутне миелогене и лимфобластне леукемије. Са хроничном лимфоцитном леукемијом и лимфомима, експресија ЦД34 антигена није детектована.

• ЦД41а се изражава тромбоцитима и мегакариоцитима. Моноклонална антитела за детекцију ЦД41а користе се за дијагнозу мегакариобластне леукемије. Са Глазманн тромбастенијом, експресија овог антигена је одсутна или значајно потиснута.
• ЦД42б је мембрански гликопротеин који се састоји од два полипептидна ланца. Маркер се налази на површини тромбоцита и мегакариоцита. У клиничкој пракси, откривање ЦД42б се користи за дијагнозу тромбоцитопатије - Бернард-Соулиеровог синдрома.
• ЦД45РА припада класи трансмембранских гликопротеина. Ово је обичан леукоцитни антиген. Изражава се на ћелијској мембрани Б-лимфоцита, у мањем обиму Т-лимфоцита и на зрелим медуларним тимоцитима. Маркер није изражен гранулоцитима.
• ЦД45РО је изомформа мале молекулске тежине ЦД45РА, чести леукоцит Аг. Налазе их на Т-ћелијама (меморијски Т-лимфоцити), субпопулације Б-лимфоцита, моноцита и макрофага. Моноклонска антитела са ЦД45РО интеракцијом са већином тимоцита, субпопулацијом ЦД4 + и ЦД8 + Т лимфоцита и зрелих активираних Т ћелија. Ћелије миеломоноцитног порекла, гранулоцити и моноцити такође носе овај антиген. Детектује се у центробластицним и имунобластицним лимфомима.
• ЦД46 - О-гликозиловани димер. То је широко распрострањен у ткивима и изразио Т- и Б-лимфоцити, моноцити, гранулоцита, НК-ћелије, тромбоцити, ендотелне ћелије, фибробласти, али је одсутан на површини еритроцита. ЦД46 обезбеђује заштиту ткива од деловања комплемента.
• ЦД61 је тромбоцитни антиген. Изражава се на тромбоцитима периферне крви и црвеној коштаној сржи, као и на мегакариоцитима и мегакариобластима. Његова дефиниција се користи као маркер за акутну мегакариобластну леукемију. Изражавање антигена је одсутно или сузбирено код пацијената са Гланзманн тромбастенијом.
• ЦД95, такође назван Фас или АПО-1, је трансмембрански гликопротеин, члан фамилије рецептора фактора туморске некрозе. Изражава се у значајним количинама на Т-лимфоците периферне крви (ЦД4 + и ЦД8 +) и, у мањој мери, на Б-лимфоците и НК ћелије. Овај антиген се такође изражава на гранулоцитима, моноцитима, ћелијама ткива и неопластичним ћелијама. Везивање ЦД95 на Фас лиганд (ЦД95Л) индукује апоптозу у ћелијама.
• ЦД95Л или Фас лиганд, мембрански протеин који припада породици рецептора фактора туморске некрозе. Овај антиген је изражен цитотоксичним Т лимфоцитима, НК ћелијама и веома често туморским ћелијама; главни индуктор апоптозе у ћелијама.
• ХЛА-ДР је мономорфна детерминанта молекула класе ИИ главног комплекса хуманог хистокомпатибилности (ХЛА). Маркер је експримиран на Лангерхансове ћелије, дендритске ћелије лимфним органима, и одређених врста макрофагима, Б лимфоцити, активирани Т ћелије и тимус епителне ћелије. Тест за овај маркер се користи за квантификацију активираних Т-лимфоцита са фенотипом ЦД3 + ХЛА-ДР +.

Користећи другачији избор моноклонских антитела на маркере, могуће је направити фенотипски портрет ћелија који су карактеристични за дату форму леукемије.

Поред коришћења техника иммунопхенотипинг за дијагнозу и диференцијалну дијагнозу хематолошких малигнитета, посебно важно је њихова употреба у процесу лечења за процену стања ремисије и резидуалног популације леукемије ћелија. Познавање фенотипски "портрет" високе ћелија у периоду од дијагнозе, до ових маркера може наћи ћелија леукемичне клон у ремисији, и од повећања њиховог броја - да предвиди развој рецидив дуго (за 1-4 месеци), док његових клиничких и морфолошких особина.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]