Имунолошка истраживања у урологији

Додјела имунограма уролошком пацијенту значи да љекар који присуствује дохвата присуство поремећаја у имунолошком систему. Дупликат бактеријске, вирусне, гљивичне инфекције, алергијске реакције, системске болести могу бити симптом ових поремећаја које карактерише низом синдрома (инфекције, рак, алергијски, аутоимуна, лимфопролиферативни). Један пацијент може имати неколико синдрома. На пример, хроничне заразне болести (заразна синдром) може изазвати слаб имунитет и имунодефицијенције могу манифестовати предиспозиције за инфективне болести и канцера (рака синдром). Предиспозиција на инфекције може се десити у позадини секундарне имунодефицијенције, која се развила као резултат лимфопролиферативне болести, на пример, леукемије. Постоје три главне групе патолошких промјена у имунолошком систему:

• квантитативна или функционална инсуфицијенција једне или друге везе имунитета, што доводи до развоја стања имунодефицијенције;
• кршење у препознавању антигена од стране имуног система, што доводи до развоја аутоимунских процеса;
• хиперреактивног или "первертираног" имунолошког одговора, који се манифестује развојем алергијских болести.

Постоје скрининг (тестови нивоа 1) и квалификације (тестови 2 нивоа) метода имунодијагностика. Први постоје да се утврде повреде у имунолошком систему, а друго - да се успоставе механизми који су укључени у њихово спровођење у сврху даље имунокорекције.

Б-Ћелијска веза имунитета

Методе скрининга

• Одређивање релативне и апсолутне броја Б-лимфоцита преко имунофлуоресценце или проточне цитометрије користећи моноклонална антитела за Б-ћелијске антигене (ЦД19, ЦД20, где ЦД - кластер диференцијације). Садржај Б-лимфоцита је нормалан код одраслих: 8-19% укупног броја леукоцита или 190-380 ћелија / μл. Повећање садржаја Б лимфоцита дешава се у акутним и хроничним бактеријских и гљивичних инфекција, хронична болест јетре, системске болести везивног ткива, хронична лимфоцитна леукемија, мултипли мијелом.
• Одређивање концентрације имуноглобулина неспеспетсифицхеских (Ф, М, Г, Е) би једноструке радијалне имунодифузијом или турбометрии непхелометри, радиоимуноесеј или ензим имуноесејом (ЕИА). Норме за одрасле: имуноглобулин (Иг) 0,9-4,5 г / л. ИгМ 03-3.7 г / л. ИгГ 8,0-17 г / л. Повећање концентрације имуноглобулина долази са истим патолошким условима у којима се јавља повећање садржаја Б лимфоцита. Смањење концентрације имуноглобулина у конгениталног хипогамаглобулинемију, тумори имуног система, уклањање слезине, губитак протеина, код болести бубрега или црева, третирања цитостатика и иммунодепреесантами.

Спецификација метода

• Одређивање циркулационих имуних комплекса у крви селективним преципитацијама у полисилен гликолу праћен спектрофотометријским испитивањем густине (нормално 80-20 УЕ). Повећање циркулационих имуних комплекса карактеристично је за акутне бактеријске, гљивичне, вирусне инфекције, аутоимуне, имунокомплексне болести, серумску болест, алергијске реакције типа 3;
• Одређивање специфичних имуноглобулина у крви у односу на бактеријске и вирусне антигене, дезоксирибонуклеинске киселине (ДНК) код аутоимуних болести, идентификацију сперме (аутоимуна неплодности) и противопоцхецхних антитела (пијелонефритис и гломерулонефритис) радијалном имунодифузијом или ЕЛИСА.
• Одређивање антисперма антитела у сперми [МАР-тест (мешана антиглобулин реакција)], норма је негативна.
• Одређивање концентрације имуноглобулина у урину ради диференцијалне дијагнозе између пијелонефритиса и гломерулонефритиса (селективност протеинурије).
• Одређивање ИгЕ садржаја у соку простате за дијагнозу алергијског простатитиса помоћу радијалне имунодифузије или ЕЛИСА. 
• Истраживање у одговор бласттрансформатион реакцији лимфоцита Б На Б-ћелија митоген (Покевеед митоген за стимулацију бласттрансформатион реакције Б-лимфоцита у присуству Т-лимфоцита), где стандардни вредност 95-100%.

Т-ћелијска веза имунитета

Методе скрининга

• Одређивање релативне и апсолутне броја матуре ЦД3 Т лимфоцита реакције имунофлуоресценцијом или протока цитофлуорометри коришћењем анти-СДЗ моноклонска антитела. Норма за одрасле је 58-76% или 1100-1700 ћелија / μл. Смањење броја Т-лимфоцита је показатељ недостатка ћелијске везе имунитета. То је карактеристика неколико основних и средњих имунодефицијенције (хроничних бактеријских и вирусних инфекција: туберкулозе, синдром стечене имунодефицијенције, рак, хроничне бубрежне инсуфицијенције, траума, стрес, старење, неухрањености, третман са цитотоксичним лековима, јонизујућег зрачења). Повећање броја Т-лимфоцита је против позадини имуног хиперактивности или лимфопролиферативним болести. Код инфламације, број Т-лимфоцита се прво повећава, а затим се смањује. Одсуство смањења Т-лимфоцита указује на хроничност инфламаторног процеса.
• Процена субпопулација лимфоцита.
  • Одређивање броја Т-помагача (анти-ЦД4 антитела). Обично, 36-55% или 400-1100 ћелија / μл. Повећање броја ових ћелија јавља код аутоимуне болести, Морбус Валденстром, имуни ацтиватион антитрансплантатсионного; смањење броја Т-помоћних ћелија јавља у хроничним бактеријским, вирусним, протозоалним инфекцијама, туберкулозе, синдром стечене имуно дефицијенције, малигнитета, опекотина, траума, потхрањеност, старења, лечење цитостатицима, јонизујуће зрачење.
  • Одређивање броја Т-супресора (анти-ЦД4 антитела). Нормално, 17-37% или 300-700 ћелија / μл. Повећање броја Т-супресора долази са истим условима у којима се број Т-помагача смањује, а њихово смањење под истим условима, када се садржај Т-помагача повећава.
  • Имунорегулаторни индекс ЦД4 / ЦД8, у норми 1,5-2,5. Хиперактивност брзином од више од 2,5 (алергијске и аутоимуне болести); хипоактивност - мање од 1,0 (предиспозиција хроничним инфекцијама). На почетку запаљеног процеса, индекс имунорегулатора се повећава, а када се сруши, нормализује се.

Спецификација метода

• Одређивање броја природних убица (НК ћелија) - анти-ЦД16 и анти-ЦД56-антитела. Норма за ЦД 16-лимфоците је 6-26%, ЦД56 - 9-19%. Повећање броја НК-ћелија јавља код одбацивања, смањити - виралних инфекција, канцер, примарних и секундарних имунодефицијенције, опекотина, са цитостатици трауме и стреса, лечење и јонизујућег зрачења. 
• Одређивање броја Т-лимфоцита са рецептором за интерлеукин-2 (активацијски маркер) - анти-ЦД25 антитела. Норма је 10-15%. Повећање њиховог броја примећено је код алергијских болести, одбацивања трансплантата, одговора на тимус-зависне антигене у акутном периоду примарне инфекције, смањења истих болести код којих се број НК ћелија смањује.
• Испитивање израза активационог маркера - молекула хистокомпатибилности ХЛА-ДР класе ИИ. Повећана експресија се јавља код инфламаторних процеса, код пацијената са хепатитисом Ц, целиакијом, сифилисом, акутним респираторним инфекцијама.
• Евалуација апоптозе лимфоцита. Индикација спремности лимфоцита апоптозе могу бити идентификовани својим експресијом површинског Фас-рецептора (ЦД95) у митохондријама и бд-2 протоонцогене. Апоптоза је процењена обрадом лимфоцита тво флуоресцентних боја: пропидијум јодида, које се везује за ДНК фрагмената и анексина И, везивање за фосфатидилсерина у ћелијској мембрани појављује почетком апоптозе. Евалуација резултата се врши на цитофлуориметру протока. Израчунавање резултата заснива се на односу ћелија обојених различитим бојама. Неумрљан ћелије су виталних ћелија, повезани само са анексина И, - рани знаци апоптозе, са пропидијум јодидом и анексина И - лате манифестације апоптозе, бојењем само пропидијум јодид означава некрозу.
• Евалуација пролиферације Т-лимфоцита ин витро.
  • Промена у бластогенези ћелија је реакција експлозије трансформације лимфоцита. Леукоцити су инкубирани са било којим митогеном биљног поријекла (лектини). Најчешће коришћен пхитохемагглутинин у трајању од 72 сата, затим направите мрље, мрљајте га и рачунајте број експлозија! Индекс стимулације је однос процента трансформисаних ћелија у експерименту (култура са фитохемагглутинином) у проценту трансформисаних ћелија у контроли (култура без фитохемаглутинина). Реакција експресије експозиције лимфоцита може се проценити укључивањем радиоактивне етикете (ЗН-тимина) у култивисане ћелије, док се синтеза ДНК повећава када се деле ћелије. Поремећаји пролиферативног одговора јављају се и код примарне и секундарне имунодефицијенције повезане са инфекцијама, онколошким болестима, бубрежном инсуфицијенцијом и хируршким интервенцијама.
  • Евалуација ових студија, експресија активације маркера (ЦД25, трансферински рецептор то - ЦД71) молекула и МХЦ класе ИИ ХЛА-ДР, који су суштински није присутан у мировању Т-лимфоците. Т лимфоцити стимулисане са фитохемаглутинин након 3 дана експресиони маркери активације су анализирани директним или индиректним имунофлуоресценције, проточне цитометрије користећи моноклонална антитела излучују рецепторе.
  • Мерење количине медијатора синтетисано активираних Т лимфоцита [интерлеукин (ИЛ) 2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, гама-интерферон, етц.], радиоимуноесејом или ЕЛИСА. Посебно је важна процена концентрације и-интерферона и ИЛ-4 као маркера ТХ и Тх2 у супернатанту активираних култура и унутар ћелије. Ако је могуће, корисно је одредити експресију гена за релевантни цитокина помоћу нивоа мессенгер рибонуклеинске киселине у треонин производи ћелија и експресију рецептора интензитети за одговарајуће цитокина.
    
• Реакција инхибиције миграције лимфоцита. Сензитизоване Т-лимфоците у реакцији са лимфокинима који ослобађају антигене, укључујући факторе. Инхибира миграцију лимфоцита. Феномен инхибиције се примећује када се митогени уводе у културу ћелија. Процена степена инхибиције омогућује процјену способности лимфоцита да ослобађају цитокине. Уобичајено је да је фреквенција миграције, у зависности од специфичног митогена, 20-80%.
• Евалуација цитотоксичности НК ћелија. Одредити способност ћелија природних убица да убију циљне ћелије еритромијелоидне линије К-562. Ако се процени цитотоксичност зависна од антитела, користе се циљне ћелије обложене ИгГ антителима. Циљне ћелије су означене са 3Х-уридином и инкубиране са ефекторским ћелијама. Смрт циљних ћелија се процењује из ослобађања радиоактивне етикете у раствор. Смањење цитотоксичности се јавља код малигних неоплазми. У неким случајевима, када је потребна прогноза о ефикасности лечења интерлеукина, цитотоксичност НК ћелија се процењује када се инкубира са одређеним цитокинима.

Испитивање функције фагоцита

Методе скрининга

Испитивање апсорпције микробних ћелија фагоцитима (фагоцитоза латексних честица, тестна култура стафилококуса, Есцхерицхиа цоли или микроорганизама изолованих од пацијента). Центрифугирањем хепаринисане крви изолована је суспензија леукоцита, серум ИВ крвне групе се додаје за опсонизацију (опсонини су протеини који побољшавају фагоцитозу). Микробиолошка суспензија се разблажи, помеша се са леукоцитима и инкубира 120 мин, узима узорак за анализу после 30.90.120 мин након почетка инкубације. Од изабраних суспензија леукоцита врши се мрља. Одредити следеће показатеље фагоцитозе:

• фагоцитички индекс - проценат ћелија који су ушли у фагоцитозу за 30 мин и 120 мин инкубације; нормативна вредност фагоцитног индекса (30) 94% фагоцитног индекса (120) - 92%;
• фагоцитни број - просечан број бактерија који су интрацелуларни; нормативна вредност фагоцитног броја (30) 11%, фагоцитни број (120) - 9,8%;  
• коефицијент фагоцитног броја - однос фагоцитног броја (30) до фагоцитног броја (120); нормалан 1.16;
• бактерицидни индекс неутрофила је однос броја микроба убијених унутар фагоцита до укупног броја узетих микроба; у норми од 66%.

Спецификација метода

• Испитивање бактерицидне активности фагоцита у тесту са нитрозин тетразолијумом (НСТ) је НСТ тест. За леукоците се дода боја нитрозатне тетразолиум жуте боје. Када се неутрофил абсорбује боја, процес редукције се одвија под дејством слободних радикала кисеоника, што доводи до плавог бојења. Реакција се одвија у плочи са равним дном са 96 дужина. У прва три бунара са мешавином ХЦТ-а и леукоцита, додан је Ханксов раствор (спонтани ХЦТ), у другом - у латексним честицама; инкубирамо на 37 ° Ц 25 минута. Резултати се чита на 540 нм на читачу и изражавају у конвенционалним јединицама. Израчунати фактор стимулације (К _ст ), једнак односу оптичке густине у стимулисаним бунарима до просечне оптичке густине у бунарима без стимулације. Код здравих људи, _{ХЦТ спонта} = 90 ± 45 УЕ, НСТ _Стим = 140 ± 60 УЕ. К _ст = 1,78 ± 0,36.
• Испитивање молекула адхезије. Помоћу цитофлуориметрије протока се одређује експресија површинских антигена ЦД11а / ЦД18, ЦД11б / ЦД18, ЦД11ц / ЦД18. Имунодефицијенције са повредом адхезије манифестују се релапсирајуће инфекције, споро зарастање рана и одсуство гњида у жариштима инфекције.

Истраживање система комплемента

Методе скрининга

Одређивање хемолитичке активности комплемента - студија класичног пута активације комплемента. Различите дилуције серума пацијента и здраве особе додају се у еритроците овна покривене антителима. Јединица хемолитичке активности узима се као инверзна за разблаживање серума, у којој се уништава 50% еритроцита. Степен хемолизе се фотометријски процењује приносом хемоглобина у раствору. Смањење хемолитичке активности комплемента примећено је код системског еритематозног лупуса уз укључивање бубрега, акутни гломерулонефритис. Комбиноване имунодефицијенције, миастенија гравис, вирусни хепатитис, лимфоми, повећавају - са опструктивном жутицом, тироидитисом Хасхимото. Реуматизам, реуматоидни артритис, нодуларни периартеритис. Дерматомиозитис, инфаркт миокарда, улцеративни колитис, Реитеров синдром, гихт.

Спецификација метода

• Одређивање компонената комплемента. Квантитативно одређивање врши се методом радијалне имунодифузије и непелометрије.
  Студија није информативна, осим ако се антигенске особине компонената комплемента не мењају.
• Утврђено је да Цлк-компонента комплемента побољшава фагоцитозу и посредује у ћелијској цитотоксичности. Његово смањење се јавља код болести имуних комплекса, системског еритематозног лупуса, гљивичних инфекција и тумора.
• Ц3-компонента учествује у активирању класичног и алтернативног путања комплемента. Смањење концентрације је повезано са хроничним бактеријским и гљивичним инфекцијама, присуством имунолошких комплекса циркулације или ткива.
• Ц4 компонента учествује у активирању класичног пута. Смањење његове концентрације је повезано са продуженом активацијом комплемента са имунским комплексима и смањењем концентрације инхибитора Ц1, који контролише активацију класичног пута комплемента. Ц4 дефицијенција долази са системским еритематозом лупуса, повећава се Ц4 код болести бубрега, одбацивање трансплантата, акутна запаљења и болести гастроинтестиналног тракта.
• Ц5а је мали фрагмент молекуле Ц5, одвојен од њега као резултат активације система комплемента. Повећање концентрације се јавља код упале, сепсе, атопијских и алергијских болести.
• Цл-инхибитор је мултифункционални фактор. Она контролише активацију Ц1 компоненте комплемента, инхибира активност каликреина, плазмин и активираног фактора Хагеман, протеазе Цлс и Ор. Недостатак Ц1 инхибитора доводи до ангиоедема.
• комплементарне студије. Стандардном серуму који нема компоненту комплемента додаје се тестни серум и утврђује хемолитичка активност комплемента. Ако се хемолитичка активност не обнови у нормалу, верује се да је активност ове комплементарне компоненте у тестираном серуму смањена.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]