Кариотинг

За проучавање хромозома се често користе краткорочне крвне културе, као и ћелије коштане сржи и фибробластне културе. Крв која се испоручује лабораторији антикоагулантом подвргава се центрифугирању за преципитацију црвених крвних зрнаца, а леукоцити се инкубирају у медијуму за културу 2-3 дана. Фитохемаглутинин се додаје у узорак крви, јер убрзава аглутинацију еритроцита и подстиче поделу лимфоцита. Најприкладнија фаза за проучавање хромозома је метафаза митозе, тако да се колхицин користи за заустављање поделе лимфоцита у овој фази. Додавање овог лијека култури доводи до повећања пропорције ћелија које се налазе у метафази, односно у тој фази у ћелијском циклусу, када се најбоље виде хромозоми. Сваки хромозом се реплицира (производи сопствену копију) и након одговарајуће боје је видљив у облику два хроматида која су причвршћена за центромере или централну констрикцију. Ћелије се затим третирају хипотоницним раствором натријум хлорида, фиксираним и обојеним.

За бојење хромозома, чешће се користи Романовски-Гиемса боја, 2% ацетаминомина или 2% ацетазарина. Они у потпуности обојавају хромозоме, униформно (рутински метод) и могу се користити за идентификацију нумеричких аномалија хромозома човека.

Да би се добила детаљна слика структуре хромозома, идентификација (одређивање) појединих хромозома или њихових сегмената, користе се различите методе диференцијалног бојења. Најчешће коришћене методе су Гиемса, као и Г- и К-савијање. Микроскопско испитивање лека дуж дужине хромозома открива серију обојених (хетерохроматина) и необојеног (еухроматин) трака. Карактер трансверзалне стезања добијен у овом случају омогућава идентификацију сваког хромозома у скупу, с обзиром да су промене пругама и њихове величине строго индивидуалне и константне за сваки пар.

Метафазне плоче појединачних ћелија се фотографишу. Појединачни хромозоми се пресецају са фотографија и залепе на листу папира; Таква слика хромозома се назива кариотипом.

Коришћење додатног бојења, као и нове методе за добијање хромозомских препарата, које омогућавају истезање хромозома у дужини, значајно повећавају тачност цитогенетске дијагностике.

Посебна номенклатура развијена је да опише људски кариотип. Нормални кариотип мушкарца и жене означен је као 46, КСИ и 46, КСКС, респективно. У Довновом синдрому, који се карактерише присуством додатног хромозома 21 (трисомија 21), женски кариотип је описан као 47, КСКС 21+, а мушкарци - 47, КСИ, 21+. У присуству структурне аномалије хромозома, потребно је указати на измијењену дугу или кратку руку: слово п означава кратку руку, к дугу руку и т а транслокацију. Дакле, када се обриси краћа рука хромозома 5 (синдром "мачка-крик"), женски кариотип је описан као 46, КСКС, 5п-. Мајка детета са транслокацијом Довнов синдром - носилац уравнотежене транслокације 14/21 има кариотип од 45, КСКС, т (14к, 21к). Хромозом транслокације се формира када се доле крајеви хромозома 14 и 21 спајају, а кратка рамена су изгубљена.

Свако раме дели се на округе, а заузврат - у сегменте, а оне и друге означавају арапским бројевима. Центромера хромозома је полазна тачка за бројање региона и сегмената.

Тако се за топографију хромозома користе четири маркера: број хромозома, симбол рамена, број подручја и број сегмента у датом региону. На пример, 6п21.3 запис значи да говоримо о 6. Хромозома пара, својој краткој руци, површине 21, сегмент 3. Постоји више опционих знакова, нарочито птер - на крају кратког руке, ктер - на крају дуге руке.

Метода цитогенетског истраживања омогућава детекцију делеција и других промена хромозома само у величини од око 1 милион база (нуклеотиди).

[1], [2], [3], [4]