Конкоцијална интравитална микроскопија рожњаче

Конкоцијална микроскопија рожњаче је једна од савремених метода истраживања; омогућава вршење интравиталног праћења стања рожњаче уз визуелизацију ткива на ћелијском и микроструктурном нивоу.

Ова метода, захваљујући оригиналном дизајну микроскопа и његовој високој резолуцији, омогућава визуелизацију живих рожњачких ткива , измерити дебљину сваког слоја и процијенити степен морфолошких поремећаја.

Сврха конфокалне микроскопије рожњаче

Карактеризирају морфолошке промене рожњаче, које проистичу из различитих инфламаторних и дистрофичних болести, као и од хируршких интервенција и ефеката ЦР.

Морфолошки подаци су потребни за процјену озбиљности патолошког процеса, ефикасност лечења и одређивање тактике управљања пацијентом.

Индикације за процедуру

• Инфламаторне болести рожњаче ( кератитис ).
• Дистрофичне болести рожњаче ( кератоконус, Фуцхсова дистрофија, итд.).
• Синдром "сувог ока".
• Услови после хируршких интервенција на рожњачу (преко трансплантације рожњаче, операција кераторефракције).
• Услови везани за ношење контактних сочива.

[1], [2], [3], [4]

Припрема

Ова студија је могућа без употребе анестетика. Капљина потапајуће течности поставља се на сочиво објектива са конфокалним микроскопом. Ово елиминише директни контакт сочива са рожњачом и минимизира ризик од епителног оштећења.

[5], [6], [7], [8], [9],

Техника конфокална микроскопија рожњаче

Студија се изводи на конфокалном микроскопу ЦонфоСцан 4 (Нидер) са повећањем од 500 пута. Уређај вам омогућава да прегледате рожнину преко целокупне дебљине.

Величина истражене зоне износи 440 × 330 μм, а дебљина слоја скенирања је 5 μм. Објектив са капљицом гела доноси се на рожнину како би се додирнула и поставила тако да је дебљина слоја уроњеног течности 2 мм. Дизајн уређаја омогућава вам да прегледате рожњачу у централној зони и њеним парацентралним подручјима.

Контраиндикације у поступку

Релативна контраиндикација означава иритацију очију на позадини акутног запаљеног процеса.

[10], [11]

Нормални учинак

Нормална морфолошка слика рожњаче

Антериорни епител се састоји од 5-6 слојева ћелија. Просечна дебљина целог епитела је око 50 μм. Према морфолошкој структури, следећи слојеви се разликују (изнутра изнутра): базални, субулативни и површни.

• Унутрашњи (базални) слој представљају мале густе цилиндричне ћелије без видљивог језгра. Границе базалних ћелија су јасне, светле.
• Средњи слој се састоји од 2-3 слоја кичмених ћелија (крилатих) ћелија са дубоким инвагинацијама, у које се граде потомци суседних ћелија. Микроскопски, ћелијске границе су прилично добро раздвојене, а језгра се не могу дефинисати или бити нејасна.
• Површински слој епителија представља један или два слоја полигоналних ћелија са јасним границама и хомогеном густином. Јукле су обично светлије од цитоплазме, у којима се такође може разликовати тамни прстен близу нуклеуса.

Међу ћелијама површинског слоја разликују се тамно и светло. Повећана рефлексија епителних ћелија указује на смањење нивоа метаболизма у њима и почетак њихове деквамације.

Бовман мембрана је провидна структура која не одражава светлост, тако да је немогуће визуализовати када се врши конфокална микроскопија.

Суббазни нервни плекус налази се под Бовман мембраном. Нормално, нервна влакна изгледају као светле траке које раде паралелно на тамној позадини, контактирају једни друге. Рефлективност (рефлексивност) може бити неуједначена у дужини влакана.

Стром рожњаче заузима 80 до 90% дебљине рожњаче и састоји се од ћелијске и екстрацелуларне компоненте. Основни ћелијски елементи строма су кератоцити; чине приближно 5% запремине.

Типичан микроскопски образац строма укључује неколико сјајних ирегуларних тела у облику овала (кератоцитне језгре) које леже у дебљини провидне тамно сиве или црне матрице. Нормално, визуализација екстрацелуларних структура је немогућа због њихове транспарентности. Строма се може условно подијелити на подлоге: антериор (налази се директно испод Бовман мембране и чини 10% дебљине строма), предње, средње и задње.

Просечна густина кератоцита је већа у антериорној строми, постепено се њихов број смањује према постериорним слојевима. Антериор густина стромални ћелијски скоро два пута већи него на задњим стромалних ћелија (уколико је густина ћелије предње строме узета као 100%, тада густина позади око 53.7% ћелија). У предњој строми, језгра кератоцита имају округли облик у облику зуба, ау задњем овалном и издуженом делу.

Јареди кератоцита могу се разликовати у осветљености. Различита способност рефлексије светлости зависи од њиховог метаболичког стања. Снажније ћелије се сматрају активираним кератоцитима ("стресне ћелије"), чије су активности усмерене на одржавање унутрашње хомеозе рожњаче. У норми и видном пољу постоје поједине активиране ћелије.

Нервна влакна у антериорној стени рожњака визуализоване су као светле хомогене траке, које често формирају бифуркације.

Десеметска мембрана је обично провидна и није визуализована конфокалном микроскопијом.

Постериорни епител је монолојер хексагоналних или полигоналних равних ћелија са равномерно лаганом површином на позадини тамних међузеличних граница.

Уређај пружа могућност ручног или аутоматског израчунавања густине ћелија, њихове површине и коефицијента варијабилности.

Патолошке промене у структури рожњаче

Кератоконус карактеришу значајне промене у антериорном епителу и стому рожњаче.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]