Конфокална доживотна микроскопија рожњаче

Конфокална микроскопија рожњаче једна је од савремених метода истраживања; омогућава интравитално праћење рожњаче визуелизацијом ткива на ћелијском и микроструктурном нивоу.

Ова метода, због оригиналног дизајна микроскопа и његове високе резолуционе моћи, омогућава визуелизацију живог ткива рожњаче, мерење дебљине сваког његовог слоја и процену степена морфолошких поремећаја.

Сврха конфокалне микроскопије рожњаче

Да се окарактеришу морфолошке промене рожњаче које се јављају код различитих инфламаторних и дистрофичних болести, као и као резултат хируршких интервенција и излагања CL.

Подаци морфолошког прегледа су неопходни за процену тежине патолошког процеса, ефикасности лечења и одређивање тактике управљања пацијентом.

Индикације за процедуру

• Упалне болести рожњаче ( кератитис ).
• Дистрофичне болести рожњаче ( кератоконус, Фуксова дистрофија, итд.).
• Синдром сувог ока.
• Стања након хируршких интервенција на рожњачи (пенетрирајућа трансплантација рожњаче, кераторефрактивне операције).
• Стања повезана са ношењем контактних сочива.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Припрема

Овај преглед се може извршити без употребе анестетика. Капљица течности за имерзију се ставља на објектив конфокалног микроскопа. Ово елиминише директан контакт сочива са рожњачом и минимизира ризик од оштећења епитела.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Техника конфокална микроскопија рожњаче.

Студија се изводи помоћу конфокалног микроскопа ConfoScan 4 (Nider) са увећањем од 500 пута. Уређај омогућава преглед рожњаче у целој њеној дебљини.

Величина испитиваног подручја је 440×330 μм, дебљина слоја за скенирање је 5 μм. Сочиво са капљицом гела се приближава рожњачи док не додирне и поставља се тако да дебљина слоја имерзионе течности буде 2 мм. Дизајн уређаја омогућава испитивање рожњаче у централној зони и њеним парацентралним областима.

Контраиндикације у поступку

Релативна контраиндикација је јака иритација ока услед акутног инфламаторног процеса.

[ 10 ], [ 11 ]

Нормални учинак

Нормална морфолошка слика рожњаче

Предњи епител се састоји од 5-6 слојева ћелија. Просечна дебљина целог епитела је приближно 50 µm. Према морфолошкој структури, разликују се следећи слојеви (од унутрашњости ка споља): базални, ћелије у облику шила и површински.

• Најдубљи (базални) слој је представљен малим, густим, цилиндричним ћелијама без видљивог једра. Границе базалних ћелија су јасне и светле.
• Средњи слој се састоји од 2-3 слоја бодљикавих (крилатих) ћелија са дубоким инвагинацијама у које су уграђени израсли суседних ћелија. Микроскопски, границе ћелија су прилично јасно разликљиве, а језгра могу бити недефинисана или могу бити нејасна.
• Површински слој епитела представљен је једним или два слоја полигоналних ћелија са јасним границама и хомогеном густином. Језгра су обично светлија од цитоплазме, у којој се такође може разликовати перинуклеарни тамни прстен.

Међу ћелијама површинског слоја разликују се тамне и светле ћелије. Повећана рефлективност епителних ћелија указује на смањење њиховог метаболизма и њихову почетну десквамацију.

Боуманова мембрана је провидна структура која не рефлектује светлост, тако да ју је обично немогуће визуализовати конфокалном микроскопијом.

Суббазални нервни плексус се налази испод Боуманове мембране. Нормално, нервна влакна се појављују као светле пруге које се паралелно протежу на тамној позадини, додирујући се једна са другом. Рефлективност (одсјајност) може бити неуједначена дуж влакна.

Строма рожњаче заузима 80 до 90% дебљине рожњаче и састоји се од ћелијских и екстрацелуларних компоненти. Главни ћелијски елементи строме су кератоцити; они чине приближно 5% запремине.

Типична микроскопска слика строме укључује неколико светлих неправилних овалних тела (језгара кератоцита) која леже у дебљини провидне тамносиве или црне матрице. Нормално, визуелизација екстрацелуларних структура је немогућа због њихове транспарентности. Строма се условно може поделити на подслојеве: предњи (налази се директно испод Боуманове мембране и чини 10% дебљине строме), предње-средњи, средњи и задњи.

Просечна густина кератоцита је већа у предњој строми, постепено се смањује према задњим слојевима. Густина ћелија предње строме је скоро двоструко већа од густине ћелија задње строме (ако се густина ћелија предње строме узме као 100%, онда ће густина ћелија задње строме бити око 53,7%). У предњој строми, језгра кератоцита имају заобљени облик пасуља, док су у задњој строми овална и издужена.

Језгра кератоцита могу варирати по осветљености. Различита способност рефлектовања светлости зависи од њиховог метаболичког стања. Светлије ћелије се сматрају активираним кератоцитима („стрес“ ћелије), чија је активност усмерена на одржавање унутрашње хомеостазе рожњаче. У норми и видном пољу налазе се појединачне активиране ћелије.

Нервна влакна у предњој строми рожњаче визуализују се као светле хомогене траке, често формирајући бифуркације.

Десцеметова мембрана је нормално провидна и не може се видети конфокалном микроскопијом.

Задњи епител је монослој хексагоналних или полигоналних равних ћелија са равномерно светлом површином на позадини јасних тамних међућелијских граница.

Уређај има могућност ручног или аутоматског израчунавања густине ћелија, њихове површине и коефицијента варијабилности.

Патолошке промене у структури рожњаче

Кератоконус карактеришу значајне промене у предњем епителу и строми рожњаче.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]